荧光定量PCR——相对定量or绝对定量

Answer 1

在进行qPCR实验时，关键的问题在于选择绝对定量还是相对定量。本文将详细解释这两种方法及其应用。首先，我们来探讨相对定量：

相对定量是测定不同样本中基因表达差异的常用方法，通过比较样本与对照样本的Ct值，反映目的基因相对比例。但要确保实验条件的一致性，通常通过内参基因校正差异，如β-actin、GAPDH和18S rRNA等。理想内参基因需稳定表达、不受实验条件影响。
计算相对定量通常用2-△△Ct法，通过比较内参基因的Ct值来调整样本间的差异。

相比之下，绝对定量则针对精确计数目标样本的拷贝数，如病毒粒子或基因拷贝数，通过标准曲线法或使用相应模板制作标准品进行定量。选择标准品时，需保持与待测样品的扩增效率一致。

总的来说，根据实验目标，绝对定量适用于需要准确拷贝数的情况，如病原体检测；而相对定量则适用于研究基因表达差异，如药物疗效评估。理解并选择合适的定量方法是实验成功的关键。下期，我们将深入探讨多重荧光定量PCR的原理和应用。