干货分享|实时荧光定量PCR qRT-PCR实验全过程（下）

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qRT-PCR实验主要分为两部分，即qPCR（实时荧光定量PCR）反应和上机测试。首先，需要按照说明书中给出的比例精确配制qPCR反应液，并将所需的cDNA按10倍稀释，然后按照特定比例将配制好的引物和稀释后的cDNA加入到八联管中，准备进行上机测试。

上机测试则在LightCycler 96仪器上进行。首先，点击Eject按钮，释放样本装载模块，然后将八联管置于离心机中，离心排除气泡和液滴，确保样品均匀分布。接着，将八联管放入仪器中，创建新的实验程序，选择detection format（检测模式）和SYBR Green I作为荧光染料，设定好温度包括升温和循环次数等参数，根据实验需求调整qPCR反应条件。

设置好反应条件后，点击Start按钮启动实验，实时监控实验进程。在实验过程中，可以通过点击“synchronization”按钮实现数据与U盘的同步保存，确保数据的完整性。实验完成后，再次点击Eject释放样本装载模块，取出八联管即可完成整个qPCR反应与上机测试的过程。

以上步骤涵盖了qPCR反应的配制与上机测试的基本流程。希望这份详细的操作指南能帮助到您，实现更加准确、高效的试验操作。记得点赞、收藏，以便在实验过程中随时查阅，让我们一起在科学的道路上不断探索与进步。关注我们，了解更多实验技巧与知识分享。