干货分享 | 招招解决qPCR曲线的疑难杂症

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对于 qPCR 实验中遇到的各类曲线难题，这篇文章提供了详细的解决方案。无论是断裂的扩增曲线、复孔间的不稳定，还是熔解曲线的复杂峰，都会让实验者感到困扰。让我们一起深入理解这些问题和解决策略。

扩增曲线和熔解曲线是 qPCR 结果评估的关键。扩增曲线反映的是PCR反应过程中荧光信号随产物积累的变化，理想的曲线应呈现四个阶段：平稳的基线期、清晰的拐点、指数增长的扩增期和平滑的曲线。复孔间曲线的一致性也是重要标准。熔解曲线则通过观察温度升高时DNA双链解链的荧光变化，确认特异性扩增和是否存在引物二聚体。

遇到问题曲线时，需一一排查。无扩增曲线可能是荧光信号未开启或引物降解；曲线不光滑可能源于仪器校准问题或模板纯度欠佳。平台期抖动和倒扣的S形曲线是信号采集误差或模板浓度过高所致。断裂的锯齿状可能是试剂ROX浓度与仪器不匹配。基线期上飘则需调整基线范围。

熔解曲线方面，无曲线或杂峰表明可能未设置或开启信号采集。引物二聚体表现为杂峰在主峰前，非特异性扩增则在主峰后。十字型熔解曲线同样涉及ROX浓度匹配问题，通过调整设置可恢复正常。

总的来说，通过理解和解决这些常见的曲线问题，实验者可以更好地掌握qPCR技巧，确保实验结果的准确性和可重复性。希望这些分享能帮助大家在遇到问题时快速找到解决办法。