最近在做microRNA的荧光定量PCR,用U6做内参,想请教一下,U6的Ct值在什么范围内,目的基因表达呈线性关系

如题所述

第1个回答  2013-02-26
我最近也要做mi RNA的荧光定量PCR,用U6做内参,但是苦于没有找到U6的基因序列(NCBI里面有好多种,不晓得哪一个是),宝生物那边以前有现成的U6引物,但现在不生产了,说只能自己提供基因序列,他们设计和合成,哎!想问一下楼主你的U6引物在哪个公司设计和合成的呀?需要提供基因序列么?是人的还是小鼠或其他物种的U6?如果方便的话,可否提供一下小鼠的U6基因序列呢?多谢!本回答被网友采纳
第2个回答  2013-01-27
你做一下标准曲线不就知道了,2小时的事情

实时定量pcr的CT值在什么范围内算作合理
通常情况下,我们认定为15到35CT比较合理,超过35个CT那么就算它没有扩增了,如果15之前起峰,那么就是模板浓度太高所引起的 在荧光定量PCR技术中,有一个很重要的概念 —— Ct值。C代表Cycle,t代表threshold,Ct值的含义是:每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数 ...

实时定量pcr的CT值在什么范围内算作合理
看你用哪家公司的试剂咯 一般10-35之间都可以吧 你可以跑个不加模板的看CT多少作为对照

microRNA的qPCR内参可以用GAPDH吗
mirna的荧光定量pcr可以用actin做内参miRNA通过与转录本的相互作用,关闭或抑制基因的表达。最近的研究表明它们影响了约三成的基因。miRNA在多个组织中差异表达,这就让表达图谱分析成为研究的重点。同时,miRNA的过表达和抑制也是近年来常用的研究方法。我知道和使用过的U6内参基因只有两个:RNU6-1和RNU6-...

最近做荧光定量PCR实验,浓度梯度之间的CT值相差还不到1,这是什么原因...
理论上一个PCR循环,1份模版变成2份,所以多一个Ct,就说明需要多扩增一个循环才能达到同样的荧光强度,模版量应该只有1\/2。也就是说理想状态下,2倍的梯度稀释应该产生Ct+1的递增。10倍的稀释就是Ct增加(以2为底的log10)。实际扩增中由于引物,模版量,杂质等的影响扩增效率可能达不到甚至超过10...

荧光定量PCR的几个问题
3. 做普通PCR把循环数增大到45试试,可能是你的基因的表达丰度太低了 4. 非特异性扩增不一定是引物的问题,另一个原因可能是你扩增的基因同源基因比较多,或者你设计的引物刚好在保守的domain区域,这样的情况即便引物再好,也很容易能扩增出来其他的东西。最后,不要心急,遇到问题一个一个解决,荧...

请问我在做荧光定量pcr的时候内参的ct值很低大约在35左右,而目的基因ct...
你选了个什么内参,表达量如此之低?感觉有点问题,检查一下融解曲线对不对。如果是正确的,说明你的目的基因表达量比内参高出一千倍啊。Ct值越大,表达量越低。

你好,我在医院做了个荧光定量pcr检测
在做PCR 是,机器升温降温,循环进行。每个循环期末,读一次信号。最后的结果就形成一个曲线。我贴了个图在下面。ct值是人为划定的一个值。单独给出时没有什么意义。如果有2个以上样本,则ct值越小,代表病原体浓度越高。如果检测的样本中没有病原体,那就不会有这个曲线 (那条蓝线)。这个检查...

请问:做荧光定量PCR时,△△Ct值是什么意思,它的计算公式是什么?
目的基因) — Ct(基准样品,内参基因)2 -△△Ct =2 -(-1.2)= 2.30 您好,答案已经给出,请您浏览一遍 有什么不懂的地方欢迎回复我!如果满意请及时点击【采纳为满意答案】按钮 或者客户端的朋友在右上角评价点【满意】您的采纳,是我答题的动力 也同时给您带来知识和财富值 ...

做荧光定量PCR时,△△Ct值是什么意思,它的计算公式是什么
△△Ct = △Ct(试验样品) — △Ct(基准样品)△Ct(试验样品) = Ct(试验样品,目的基因) — Ct(试验样品,内参基因)△Ct(基准样品) = Ct(基准样品,目的基因) — Ct(基准样品,内参基因)2 -△△Ct =2 -(-1.2)= 2.30

请问:做荧光定量PCR时,△△Ct值是什么意思,它的计算公式是什么
Ct= -k lgX0+ b(线性方程)用这个方程可以通过Ct值算出样品的起始浓度 斜率=-1\/lg(1+e)扩增效率E=1, 斜率=-3.32 扩增效率范围:90%-110 斜率范围:-3.1和-3.59之间 例如,想看a基因和b基因在某细胞系中表达量的差别,选取18s作为内参基因,就用a基因的Ct值减去18s的Ct值,得到△Ct1...

相似回答