组织培养的方法和程序有哪些？

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1. 外植体选取与消毒
外植体的选择通常分为两类：一类是带芽的外植体，如茎尖、侧芽等，这些外植体可以直接诱导丛生芽的形成，并且成功率较高，遗传变异较小。另一类包括根、叶等营养器官以及花药、花瓣等生殖器官，这些外植体通常需要经历脱分化和愈伤组织阶段才能分化成芽或形成胚状体，进而再生出植株。茎尖是快速繁殖中最常用的外植体，消毒时需要考虑外植体的种类、生长条件、季节等因素，选择合适的消毒剂和程序。
2. 外植体的增殖
外植体的增殖是组织培养中的关键步骤。接种后的外植体在培养室中，通常在16小时的光照下，于25℃左右的温度进行分化培养。为了扩大繁殖系数，需要进行继代培养。继代培养基通常在分化培养基的基础上进行改良，以提高增殖率。经过约一个月的培养，可以进行再增殖，通过多次继代培养，增加植株数量。
3. 根的诱导
继代培养形成的不定芽和侧芽通常无根，需转移到生根培养基上。生根培养基常用1/2MS培养基，降低无机盐浓度有助于根的分化。生根培养基与增殖培养基在激素种类和浓度上有显著差异，通常细胞分裂素抑制生根，而生长素促进生根。约一个月后，可以形成健壮的根系。
4. 组培苗的炼苗移栽
生根或形成根原基的试管苗需要经过炼苗过程，从无菌环境适应自然环境，从异养过渡到自养。移栽前，先在自然光照下打开培养容器盖子，然后取出苗，清洗根系上的琼脂，栽入准备好的基质中。移栽初期需适当遮荫，控制水分，保持较高湿度。温度控制在15～25℃最适宜。炼苗4～6周后，新梢开始生长，小苗即可转入正常管理。