第1个回答 2013-03-06
一个完整的植物组织培养过程一般包括以下几个步骤：
（1）准备阶段
查阅相关文献，根据已成功培养的相近植物资料，结合实际制订出切实可行的培养方案。然后根据实验方案配制适当的化学消毒剂以及不同培养阶段所需的培养基，并经高压灭菌或过滤除菌后备用。
（2）外植体选择与消毒
选择合适的部位作为外植体，采回后经过适当的预处理，然后进行消毒处理。将消毒后的外植体在无菌条件下切割成一定大小的小块，或剥离出茎尖，挑出花药，接种到初代培养基上。
（3）初代培养
接种后的材料置于培养室或光照培养箱中培养，促使外植体中已分化的细胞脱分化形成愈伤组织，或顶芽、腋芽直接萌发形成芽。然后将愈伤组织转移到分化培养基分化成不同的器官原基或形成胚状体，最后发育形成再生植株。
（4）继代培养
分化形成的芽、原球茎数量有限，采用适当的继代培养基经多次切割转接。当芽苗繁殖到一定数量后，再将一部分用于壮苗生根，另一部分保存或继续扩繁。进行脱毒苗培养的需提前进行病毒检测。
（5）生根培养
刚形成的芽苗往往比较弱小，多数无根，此时可降低细胞分裂素浓度或不加，提高生长素浓度，促进小苗生根，提高其健壮度。
（6）炼苗移栽
选择生长健壮的生根苗进行室外炼苗，待苗适应外部环境后，再移栽到疏松透气的基质中，注意保温、保湿、遮荫，防止病虫危害。当组培苗完全成活并生长一定大小后，即可移向大田用于生产。
如：茎尖→表面消毒→接种诱导培养基→茎尖生长→病毒检测鉴定→培养无根小植株→培养生根→完整小植株→炼苗20-25天→移栽成活。
常规情况下详细的生产流程图如下：
对不同的品种词流程会略有差异，如进行果树育苗还需进行嫁接等操作流程，但对组培工厂化育苗而言，一般可根据上面的流程图来安排各项作业，只有相互衔接好、配合好，才能提高生产效益。
第2个回答 2013-03-12
家庭组织培养
植物的组织培养没有最基本的条件和物品是搞不成的，当时合理的利用一些最简单的用具也并非无法办到。
一、最必需的物品
1、.家用高压锅 1个最好大一点的，装的东西多一点。用于培养基、无菌水等的消毒
2、接种箱 （无菌箱）1个 ，需要自己自制，用一些木板和一块玻璃和二尺布料。用于接种和转移。
3、药用天平1架 最好是500g称量的，小一点也可以，主要用来称琼脂、糖等物品。
4、不锈钢锅或铝锅（煮汤、面条的那种）买。用于煮制培养基用的。
5、搅拌和分装培养基用的调羹一个，用于煮制和分装培养基。
6、培养用的瓶子若干，
7、制棉塞用的棉花、纱布和线若干，用于做瓶口的塞子，要注意的是，棉花要使用普通做棉衣的棉花，不要用医院用的脱脂棉，这样容易穿塞污染。
8、牛皮纸、橡皮圈若干，用于包瓶头和扎包头纸用。
9、酒精灯1盏、解剖刀1把，刀片若干、镊子2把、10ml、100ml量筒各一个，2ml移液管1只、药棉若干。
二、怎样解决蒸馏水和基本药品
培养基的用水在一般人的心目总是觉的十分重要的，其实是多余的担心。冷开水、清洁的河水都是给以用的，并不影响培养的效果。市场上出售的纯净水更是一般培养基理想的用水。最常用、最必要、用量最大的只需购买以下几种就行了。
1、MS培养基的大量元素（家庭或所谓袖珍组培室的培养一般采用MS基就可以了。）共5种。也可以买市售的MS培养基
（1）、硝酸铵
（2）、硝酸钾
（3）、 氯化钙
（4）、硝酸镁
（5）、磷酸二氢钾
2、酒精
3、精密试纸（PH 5.4－7.0）
4、漂白粉或漂白精
5、琼脂
6、白糖
7、福尔马林
8、高锰酸钾（可以到医院或药材商店去买）
9、微量元素、铁盐、维生素类以及激素类药品应用量极少。比如一些激素、维生素类的药品及有针剂也有片剂，他们都有比较准确的含量，你可以去按你的需要去配制比例。
爱好者在家庭环境下进行组织培养的探讨与建议植物组织培养技术，尤其是快速繁殖，并非只有专业人员和专业实验室才能够完成的。作为对多肉植物和组织培养有着浓厚兴趣的爱好者，在充分利用家庭条件的基础上，同样可以制备出自己的试管苗来的。在我们进行多肉植物的栽培中认识到，一些比较名贵的园艺品种，比如：万象、玉扇、寿、高纹鹰爪等十二卷属品种，还是缤纷橄榄、何鲁牵牛等块茎类植物，甚至于星球属、岩牡丹属等等，这些植物的常规繁殖系数很低，他们都可以采用组织培养来解决其繁殖问题，并且可以得到相当数量的幼苗。对于奇想天外等种子萌发困难的植物，同样可以借助组织培养来进行无菌播种。在进行组织培养过程中，不但可以对培养的植物有更深一层的认识，对常规的栽培有着相当大的意义。许多搞组织培养的专家，最初都不是专业学组培的，就是凭着兴趣和探索精神取得辉煌成绩的。关键是，爱好者有着浓厚的兴趣，非凡的观察力和细致入微的操作，这些都可以弥补非专业的缺陷，并且可以充分利用日常生活中的各种可利用资源，这些就足以让爱好者在家庭环境下完成组织培养了。同时这也不仅仅满足了自己的兴趣，还可以有一定的经济收益，甚至可以有所创新和发明。
一、如何解决场地和基本设备：
进行组织培养，没有一定的设备是无法开展的。正规实验室的组织培养设备是昂贵的，不适合家庭消费，但如果能有途径买到廉价的实验室设备，那就在好不过了。如果没有办法搞到实验室设备，就不妨动手自己制作一些简单的设备。
1.无菌操作的主要设备——接种箱和压力锅：
接种箱：植物组织培养的主题操作需要在一个相对密闭的无菌环境中进行。那么说我们首先要创造一个密闭的环境，可以利用一些木料、塑料板、有机玻璃、铝合金骨架等等廉价的材料，动手粘合一个小巧的接种箱。具体的参数可以找一本“食用菌栽培”的书籍，模仿种蘑菇的接种箱做一个即可。需要注意的是，组织培养的接种箱的密闭性要求比较高，尽量避免腐朽的木材和易生锈的材料，箱子的顶端按放两盏灯：20w的紫外线灯和20w的日光灯。箱体的周边尽量采用玻璃材料，因为这样便于观察，有时候接种箱还可以借用为培养箱，周边采用玻璃材料更方便于观察和培养。
高压锅：主要用来对培养基和其他材料的灭菌。在实验室通常使用医用高压灭菌器，然而在家庭要充分利用厨房使用的高压锅，高压锅的压力要低于灭菌器，但是适当延长灭菌时间，还是可以取得较好的效果的。比如：对培养基灭菌40分钟就基本上可以达到灭菌效果（灭菌器是20分钟）；无菌水采用间歇灭菌法，先用高压锅压40分钟，放置24小时，再压20分钟即可达到效果。
2.场地：
这个就因人而易了，总体的要求就是进行组织培养操作的地方要尽量无尘，减少空气流动，最好有一定的阳光。比如书房、写字间都可以用来进行无菌操作。
进行培养基的配制可以借用一下厨房，但所使用的器具必须和厨具分开。一般说，组织培养中的几乎全部化学物质对人体是无害的，除了少数激素类物质和灭菌剂。对于有毒害的物质，需要认真保管，以免发生危险。
3.辅助设备：
主要指冰箱，它是用来储存化学物质和培养基的。天平，可以采用感量在100克的托盘天平，甚至用中药的药衡都可以代替。培养架，这个就更简单了，采用铝合金-玻璃的培养箱既可以满足要求，如果日光不足，可配合日光灯补光等。
4.化学试剂：
化学试剂是不可缺少的，因为组织培养的核心就是培养基的成分，而并不是简单的无菌操作。一些用量较大的化学物质是有必要买的，比如大量元素（硝酸铵、硝酸钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钙等）、高锰酸钾、甲醛、酒精、白砂糖、琼脂等等。微量元素和有机复合物不需要购买，因为它们的用量很小，我们可以用蔬菜浸汁或者马铃薯浸汁来代替。激素是必不可少的，他们的称量需要借助分析天平，但这是家庭条件所不允许的，如果有条件可以借助关系单位代替配成母液，每次取一些使用即可。最好的办法是到农资商店（卖农药化肥的地方），它们一般出售农业用的激素，有的是用安瓿装的，按照一定的比例加入到培养基当中即可。近几年来，有些化学品公司开始生产植物组织培养基原粉，只需要称取一定量加水即可，很方便。比如泛生化学品公司生产的ms原粉，只需要称量40克，加1升水，用微波炉加热5分钟即可分装，相当简便。
消毒剂通常采用氯化汞（剧毒），如果不容易搞到，可以用漂白粉代替。
调节酸碱度时，可以采用家庭常用的纯碱和白醋。
5.培养容器和玻璃仪器：
组织培养的容器要求并不高，只要玻璃颜色为透明色即可（钠玻璃不可以）。
我们可以到垃圾站去看看，捡回一些废旧的果酱瓶就可以了。比较好用的是阿香婆辣酱瓶，我们实验室也是采用的这种瓶子。瓶子的封口膜采用聚丙烯塑料即可，如果不好找到，可以采用微波炉专用的锡箔纸甚至方便面的袋子，折叠成双层，用橡皮圈固定即可。
其它玻璃仪器，比如烧杯、玻璃棒都可以用家庭的杯子和筷子代替；一些度量仪器，如量筒和移液管最好到玻璃仪器商店购买，恐怕花不了20元钱就可以配置一套相当棒的组培玻璃仪器。
6.其它：
还有一些用品是必需的。比如精密ph试纸（5.4~7.0），需要买一本，大约花1.5元即可搞定；酒精灯也不需要买，用墨水瓶配上一个玻璃环，再加上一个棉花芯，最后用农夫山泉矿泉水的瓶盖做灯冒，这样的酒精灯很小巧，适合接种箱使用。刀子剪子镊子是必需的，到花市的工具摊位上，花10元钱全部搞定，注意选比较小巧的工具。
关于用水，按理说应该使用蒸馏水，但是我们家庭饮用的纯净水比蒸馏水还要纯，那么说借用一些饮用水就可以了。我们曾经采用康师傅纯净水进行动物细胞的培养，效果都是很不错的，更何况于植物细胞培养了。
以上是组织培养的基本设备和试剂，主要突出了他们相关的替代品，因为作为组织培养中的快速繁殖，它的要求是相当低的。我们的家庭培养和工厂化是不同的，工厂化生产组培苗要追求高增殖率，所以它的要求就比较精细和标准。我们的家庭培养则不需要那么准确，只要达到培养成功的目的即可。当然，如果想提高增殖倍率和试管苗的品质，必须尽量贴近实验室的用具和器材，代用品总是有一定的缺陷的。
（一）必须的设施物品及代用品
1、代用品
家庭用的电冰箱，可用于贮存培养基母液（4℃）及需低温贮存的药品（如生物调节剂）。
高压锅：它可用于培养基、无菌水、玻璃器皿及其他组培用具的消毒灭菌。如所用水硬度大可用凉白开水，进行消毒灭菌。避免被消毒灭菌物品表面结垢。
不锈钢锅或铝锅：它可用于培养基、溶化琼脂（起水浴锅作用）及组培用具消毒灭菌。
刷净的废弃食油桶：它可以用来贮存蒸馏水。
小白瓷碟：可以用于接种及盛放消毒液（若放消毒液，就不要再食用，以免中毒）。
日光灯：它可用于组培过程中光源补充。
洗净废弃的罐头瓶：它可以用于组培培养之用，代替锥形瓶、试管。
组培场地可在自己的房间内进行。在配制培养基和接种时，不要赶在家庭成员较多时进行，如室内已安装了空调，那么在初代培养和继代培养、乃至小苗过渡时均有好处。
2、自制用具
（1）接种箱的制作：组培过程中的超净工作台是很贵重的设备。如果我们用自制的接种箱来代替，就可以大大节省开支，有利于普及。
自制的接种箱的用料，可以是胶合板、纤维板、玻璃（3毫米厚）、木条（装修房屋用的龙骨），甚至可以用使纸板的包装箱（包装箱的质量要稍好一些的，如电视机的包装箱），也可以用有机玻璃。
其接种箱的大小，可以根据各自的家庭条件制作。制作太小不便于操作，但相对来说消毒容易，且占地较少；制作较大的便于操作，但消毒工作显得不易，且占地面积较多。一般来说作成70厘米长、45厘米宽。50厘米高较为合适。
（2）培养箱的制作：培养箱可代替培养室，也可以用于过渡苗使用。它可以用玻璃制作，或利用长方形鱼缸。因此，可用玻璃粘结制作。其大小可按自己家庭居室面积和组培的量来决定。
3、需购置用具
普通天平（500克）：用于称量配制培养基药品，或用称量金银、中药的戥子称，用于称量配制培养基药品、微量元素及生物调节剂；或购买微量元素及生物调节剂时，买已分装的。酒精灯1盏：用于接种时，灼烧消毒灭菌。漏斗（亦可用购买桶装食用油，所配给的漏斗）：用于分装培养基用。长镊子2把：用于接种。解剖刀2把、刀片若干：用于接种。10、50、100毫升量筒各1个：用于配制培养基用。长把牛角勺2把：用于配制培养基取药品。1、2、5毫升移液管各1个：用于配制培养基用。
耐高温塑料膜或牛皮纸：用于包扎培养瓶口及表糊自制接种箱内部棱角处。橡胶圈：用于绑扎培养瓶口。脱脂棉：用于操作人员及组培用具酒精棉球消毒。pH(5～7）试纸1本：用时可剪成小条检测培养基pH值。酒精1瓶：用于酒精灯及消毒。漂白粉1瓶：用于消毒。福尔马林1瓶：用于接种箱消毒（在每次操作前2～10小时，将10～20毫升福尔马林倒入小白瓷碟内，在操作前取出）。MS培养基所需药品；用于配制培养基。盐酸及氢氧化钠：用于调pH值。如若购置1盏紫外灯，进行室内及接种箱消毒更为理想。
（二）操作时注意事项
家庭操作与单位不同，因而要注意以下事项：要注意安全，妥善保管药品。特别对老人和小孩；操作时要消毒仔细严格，接种时操作人员戴好口罩、工作帽，避开电风扇及大风沙天气，家庭成员多时避免操作；消毒前后避免家庭所养宠物进人工作间；药品称量要准确无误；如果家庭不具备温度调控（如调温空调），应避免在盛夏、寒冬进行；红掌组培要一步步来作，可先作容易组培的花卉，待取得经验后再做难作的花卉。
1.培养容器和玻璃仪器的准备：
进行培养基的配制首先要准备好培养瓶和配制使用的玻璃仪器。培养瓶一般使用各种果酱瓶，要先用洗洁精浸泡瓶子4~8小时，再用流水冲洗数次。其他的玻璃仪器同样需要这样清洁，直到玻璃壁上不挂水珠而是成为水膜为止。清洗完毕的玻璃容器要倒扣，空去瓶内的水。
清洗干净的容器要注意防尘，尽量放置在玻璃柜中。更简单的是用干净的毛巾将容器盖住。
移液管要用吸球来清洗，反复用蒸馏水吹吸直到洁净为止，将移液管放置在一个长筒中，便于使用。一般移液管只能使用一次，即要清洗，所以有多必要准备几只移液管，建议：10ml/2支，5ml/2支，1ml/5支。
2.培养基的配制：
经典的组织培养用培养基是ms配方，其基本上划分为：大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、植物激素、糖和支持物。这些成分的用量都在毫克级，用普通天平是难以称量的，为了解决这个问题，我们可以按比例放大各成分的用量配制成母液，使用的时候按一定比例加入即可。
下面将一种ms培养基的母液配制方案公布如下：
大量元素：硝酸铵66.0克；
硝酸钾76.0克；
无水氯化钙13.3克；
七水硫酸镁14.8克；
磷酸二氢钾6.8克。
以上分别溶解后合并定容到1升，每配制1升标准ms培养基取25毫升。
铁盐：七水硫酸亚铁5.56克；
乙二胺四乙酸二钠（edtana）7.46克。
以上两种分别加热溶解，混合，定容到1升，调整ph到5.5以下，每配制一升ms取5毫升。
微量元素和有机复合物的用量过于微小，为了简便我们可以用蔬菜提取液或者马铃薯提取液代替。通常我们习惯用100克菠菜加100ml的水煮沸10分钟，过滤留滤液，每配制1升ms培养基加入20~50毫升提取液。同样也可以使用带皮马铃薯100克加200毫升水煮沸15分钟，过滤留滤液，每升ms加入50~100毫升即可。
加入上述各组分后，每升ms培养基还需要加入白砂糖30克，琼脂7克。
这里要说明的是，糖和琼脂都是可变的量，要根据需要调整。另外制作果冻用的卡拉胶也可以代替琼脂，透明度更好。
上述各成分加入后，定容到800毫升左右，用微波炉加热，直到琼脂全部溶解为止。此时加入所需的植物激素（通常配制成0.1%溶液，这样每取1毫升，换算到培养基中就是1ppm）。然后加水定容到1100毫升（1.1升），之所以多出0.1升是为了抵消分装和消毒中的损耗。最后用酸碱调整ph到5.8~6.0。
3.使用ms原粉配制培养基：
目前国内的一些化学品公司开发了简便的ms培养基原粉，大大简便了培养基的配制，根据不同公司的说明选择培养基的种类。下面就以ms原粉为例： ms培养基原粉，包括了大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、糖和琼脂，一般按使用方法称量，微波炉加热溶解，加入激素，定容到1100毫升（1.1升），调整ph值到5.8~6.0。
4.分装：
将配制好的培养基分装在培养容器中，注意要趁热分装，因为琼脂在40度以下就会凝固。每个培养瓶装培养基大约是瓶容积的1/6~1/5，注意不要将培养基挂在瓶的外壁，这样容易造成污染。分装后用聚丙烯薄膜或着方便面的袋子封口，用胶圈固定（胶圈尽量选择自行车的内胎，这种胶圈比较耐热）。
5. 灭菌：
采用家庭压力锅消毒，建议到医疗器械用品商店买一些“灭菌效果试纸”，它们可以指示灭菌效果，当灭菌达到效果时会变色。把试纸和培养基同时放入锅内，加热到有大量蒸汽冒出，再加上压力伐，维持小火30~40分钟。
灭菌完毕后自然冷却，将培养基取出，放在阴凉无尘处备用。
6. 接种箱的准备：
新制作的接种箱必须要清洁干净，尽量做到无死角。每次使用前2小时，将操作所需要的全部物品放入接种箱，再用一个小烧杯加入3~5克高锰酸钾放入接种箱内，在箱内向烧杯中倒入2~3毫升的甲醛溶液，大约几秒钟后会看到甲醛蒸汽出现，这样可以对接种箱内的所有物品进行初次消毒；同时打开紫外线灯照射。紫外线灯是高电压穿激汞蒸汽产生的，紫外线进行第二道灭菌，在紫外线照射大约15分钟后，会激发氧气形成臭氧，臭氧作为第三道灭菌防线，这样经过三次灭菌，接种箱基本上可以达到无菌标准。
在操作前15分钟内，向刚才蒸发甲醛用的烧杯中倒入5毫升浓氨水，因为甲醛对人体有毒害作用，氨水可以和甲醛形成一种叫做“六亚甲基四胺”的固体物质，从而中和了甲醛的刺激性蒸汽。这个时候紫外灯不要关掉，要继续照射，直到操作前5分钟关闭，维持黑暗5分钟，然后再打开日光灯进行操作。维持5分钟黑暗的原因是，紫外光对微生物的杀灭是作用于dna的胸腺嘧啶，形成四聚体，但是微生物具有一种光复活蛋白，可以在有可见光的环境下还原胸腺四聚体，而使微生物复活，这个作用叫做“光复活作用”，所以在关掉紫外灯后必须维持黑暗几分钟，避免光复活作用的出现。
怎样在家庭开展组培工作
制备
家庭组培因受到条件的限制，不可能配置大量的配养基，，一般每次配置1升为宜。煮制后用PH试纸测定后，分装成35－40瓶，塞好棉塞，包好包头纸。（棉塞一定要用作棉衣的棉花卷制，不能使用脱脂棉，然后用纱布包紧，用棉线扎好。棉塞的松紧以手提棉塞瓶子不滑落为宜。）然后放入高压锅里高压灭菌，待高压锅喷嘴喷出蒸汽时，扣上压力阀，从压力阀喷气时起计时，连续维持15－20分钟后关火，压力消失后，打开锅盖，取出配养基，放入接种箱内待用。初次实验时，灭菌后的培养基应放置三五天后，观察无霉菌生长时才能使用。如有霉菌长出，这说明灭菌时间不够，，需要适当增加灭菌时间。
接种
将灭菌后的配养基、无菌水、消毒药水及使用的器材放入接种箱内，因接种箱内的体积相对较小，所以所用的一切物品都要有序地摆放在相应的位置上，不能随意摆放，箱内湿度较大，点酒精灯一定要是用打火机，不要使用火柴。要特别注意准备好装污水、污物的容器，尽可能地大一些，因为操作时是不容许开箱取物的。把所有的物品放置好以后，将一装有10－20ml福尔马林的磁杯放入箱内（最好不要使用玻璃杯，因反应时温度较高，容易炸裂。），倒入2－5g高锰酸钾（PP粉），使其蒸气充满箱内，达到灭菌的效果。这时要将接种箱的通气孔和操作孔封闭好，避免甲醛蒸气很快散尽。待箱内蒸气散尽后，才能开始接种工作，这段时间大约需要5－10个小时。
接种时，揭去密封在接种箱通气孔和操作孔上的密封物，取出熏蒸用的磁杯，将接种用的材料送入接种箱内，开启紫外线灯，十五分钟后关闭紫外线灯，开启照明灯，即可开始工作。操作时一定要树立无菌观念，要把一切物品都看成是带菌的，要时时都注意防范。工作是由于箱内温度较高，湿度较大，手容易出汗，所以每接种一瓶后都要用酒精擦拭手指，也可以戴指套。另外，操作时要注意防火，由于空间较小，一不小心就容易烧伤手指或引起酒精起火。打开瓶塞时，要将瓶口置于酒精灯上方，用右手的无名指和小指夹住棉塞尾，轻轻将棉塞拔出，棉塞不能置于箱内物品上，应用手指夹住，接种后，将瓶口在酒精灯上烧灼一下，棉塞也烧灼一下，，然后在酒精灯火焰上方轻轻塞好，扎好包头纸，用铅笔标明品种、接种日期、编号等，然后重复下一瓶。
其实，用接种箱接种与超净工作台相比较，工作时人要感觉舒适得多。污染率也是很低的，操作熟练后几乎没有什么污染发生。接种后愈伤组织分化、小苗分化、生长状态与在超净台上接种的没有什么两样。
培养
在家庭的业余条件下培养培养的条件不可能得到专控，所以要充分的利用自然条件，接种后的培养瓶可以放在有较强散射光的地方，如靠窗的书柜、写字台上，但要避免日光直射，一般室温在22－28摄氏度时都能正常生长，不是特殊的品种不需要特殊的护理。如室温太低，可以用纸板、木条、塑料薄膜做一个简单的培养箱，里面装一两个15－25瓦的白织灯，既可以补助光照也可以提高培养的温度。夏天温度过高时，有条件的可以摆放在空调室内，，没有空调室的，降温虽然困难一些，但大多数试管苗是可以耐受的，不至于死去。小苗长出后，摆放在书柜或工作台上，感到自己培养出来的生机勃勃的小生灵，无疑是一种享受。
栽培
当小苗长到一定的时候，就可以配置一些生根配养基将小苗转移培养生根，待长出一定根系时，就可以出瓶种植了。小苗出瓶种植的时候一定要注意以下几个方面，一是要适当降低温度；二是要增大湿度；三是要严格控制杂菌危害；四是要保证种植介质的疏松透气；五是要保证适当的光照。我通常是用跖石、木屑、稻谷壳混合作基质，把小苗种植后用百菌清喷雾浇根，盖上塑料薄膜，少量的小苗干脆用玻璃杯盖住，大约15天后就能揭去覆盖物，便可进行正常管理了。
家庭开展组培其实也并不是一件什么很困难的事情，只要多开动脑筋，多想一些办法，做起来也是很容易地。万事开头难，办法总比困难多。我1974年在一个县烤烟研究所里当所长，原来条件不允许，科研经费很紧张，刚开始的时候，一年的科研经费只有3000元，那年我做过烟草的花药单倍体、水稻花药培养、柑桔胚乳培养、黑皮果蔗茎尖组织培养、田三七愈伤组织培养、黑节草（石斛）种子的无菌培养、体细胞融合，都获得了很好的成绩，我们就是用这种方法做的，当时北京、上海很多的研究单位来看了很吃惊，他们认为很珍贵的组培小苗，被我们丢得到处都是，觉的不可思议，他们做不出来的，竟然在我们一个十分闭塞的山区里可以做出来。我说这个话的意思不是为自己吹嘘摆功，而是告诉想从事这个行业的朋友，不要自己把自己的能量看得太低，也不要迷信权威、只要自己有信心，严格地按照科学的规律去做，没有什么做不了的，没有什么办不到的。
家庭组培培养基的选择与效果评价
选择合适的培养基是植物组织培养成功的基础。
选择合适的培养基主要从以下两个方面考虑：一是基本培养基；二是各种激素的浓度及相对比例。
MS培养基适合于大多数双子叶植物，B5和N6培养基适合与许多单子叶植物，特别是N6培养基对禾本科植物小麦、水稻等很有效，White培养基适合于根的培养。
首先试用这些培养基进行初步实验，可以少走弯路，大大；减少时间、人力和物力的消耗。当通过一系列初试之后，可再根据实际情况对其中的某些成分做小范围调整。
在进行调整时，以下情况可供参考。一是当用一种化合物作为氮源时，硝酸盐的作用比铵盐好，但单独使用硝酸盐会使培养基的PH向碱性方向漂移，若同时加入硝酸盐和少量铵盐，会使这种漂移得到克服。二是当某些元素供应不足时，培养的植物会表现出一些症状，可根据症状加以调整，如氮不足时，培养的组织常表现出花色苷的颜色（红、紫红色），愈伤组织内部很难看到导管分子的分化；当氮、钾或磷不足时，细胞会明显过度生长，形成一些十分蓬松，甚至呈透明状的愈伤组织；铁、硫缺少时组织会失绿，细胞分裂停滞，愈伤组织出现褐色衰老症状；缺硼时细胞分裂趋势缓慢，过度伸长；缺少锰或钼时细胞生长受到影响。
培养基外源激素的作用也会使培养物出现上述一些类似的情况，所以应仔细分析，不可轻易下结论。
植物的组织培养没有最基本的条件和物品是搞不成的，当时合理的利用一些最简单的用具也并非无法办到。
一、最必需的物品
1、.家用高压锅 1个最好大一点的，装的东西多一点。用于培养基、无菌水等的消毒
2、接种箱 （无菌箱）1个 ，需要自己自制，用一些木板和一块玻璃和二尺布料。用于接种和转移。
3、药用天平1架 最好是500g称量的，小一点也可以，主要用来称琼脂、糖等物品。
4、不锈钢锅或铝锅（煮汤、面条的那种）买。用于煮制培养基用的。
5、搅拌和分装培养基用的调羹一个，用于煮制和分装培养基。
6、培养用的瓶子若干，
7、制棉塞用的棉花、纱布和线若干，用于做瓶口的塞子，要注意的是，棉花要使用普通做棉衣的棉花，不要用医院用的脱脂棉，这样容易穿塞污染。
8、牛皮纸、橡皮圈若干，用于包瓶头和扎包头纸用。
9、酒精灯1盏、解剖刀1把，刀片若干、镊子2把、10ml、100ml量筒各一个，2ml移液管1只、药棉若干。
二、怎样解决蒸馏水和基本药品
培养基的用水在一般人的心目总是觉的十分重要的，其实是多余的担心。冷开水、清洁的河水都是给以用的，并不影响培养的效果。市场上出售的纯净水更是一般培养基理想的用水。最常用、最必要、用量最大的只需购买以下几种就行了。
1、MS培养基的大量元素（家庭或所谓袖珍组培室的培养一般采用MS基就可以了。）共5种。也可以买市售的MS培养基
（1）、硝酸铵
（2）、硝酸钾
（3）、 氯化钙
（4）、硝酸镁
（5）、磷酸二氢钾
2、酒精
3、精密试纸（PH 5.4－7.0）
4、漂白粉或漂白精
5、琼脂
6、白糖
7、福尔马林
8、高锰酸钾（可以到医院或药材商店去买）
9、微量元素、铁盐、维生素类以及激素类药品应用量极少。比如一些激素、维生素类的药品及有针剂也有片剂，他们都有比较准确的含量，你可以去按你的需要去配制比例。
爱好者在家庭环境下进行组织培养的探讨与建议植物组织培养技术，尤其是快速繁殖，并非只有专业人员和专业实验室才能够完成的。作为对多肉植物和组织培养有着浓厚兴趣的爱好者，在充分利用家庭条件的基础上，同样可以制备出自己的试管苗来的。在我们进行多肉植物的栽培中认识到，一些比较名贵的园艺品种，比如：万象、玉扇、寿、高纹鹰爪等十二卷属品种，还是缤纷橄榄、何鲁牵牛等块茎类植物，甚至于星球属、岩牡丹属等等，这些植物的常规繁殖系数很低，他们都可以采用组织培养来解决其繁殖问题，并且可以得到相当数量的幼苗。对于奇想天外等种子萌发困难的植物，同样可以借助组织培养来进行无菌播种。在进行组织培养过程中，不但可以对培养的植物有更深一层的认识，对常规的栽培有着相当大的意义。许多搞组织培养的专家，最初都不是专业学组培的，就是凭着兴趣和探索精神取得辉煌成绩的。关键是，爱好者有着浓厚的兴趣，非凡的观察力和细致入微的操作，这些都可以弥补非专业的缺陷，并且可以充分利用日常生活中的各种可利用资源，这些就足以让爱好者在家庭环境下完成组织培养了。同时这也不仅仅满足了自己的兴趣，还可以有一定的经济收益，甚至可以有所创新和发明。
一、如何解决场地和基本设备：
进行组织培养，没有一定的设备是无法开展的。正规实验室的组织培养设备是昂贵的，不适合家庭消费，但如果能有途径买到廉价的实验室设备，那就在好不过了。如果没有办法搞到实验室设备，就不妨动手自己制作一些简单的设备。
1.无菌操作的主要设备——接种箱和压力锅：
接种箱：植物组织培养的主题操作需要在一个相对密闭的无菌环境中进行。那么说我们首先要创造一个密闭的环境，可以利用一些木料、塑料板、有机玻璃、铝合金骨架等等廉价的材料，动手粘合一个小巧的接种箱。具体的参数可以找一本“食用菌栽培”的书籍，模仿种蘑菇的接种箱做一个即可。需要注意的是，组织培养的接种箱的密闭性要求比较高，尽量避免腐朽的木材和易生锈的材料，箱子的顶端按放两盏灯：20w的紫外线灯和20w的日光灯。箱体的周边尽量采用玻璃材料，因为这样便于观察，有时候接种箱还可以借用为培养箱，周边采用玻璃材料更方便于观察和培养。
高压锅：主要用来对培养基和其他材料的灭菌。在实验室通常使用医用高压灭菌器，然而在家庭要充分利用厨房使用的高压锅，高压锅的压力要低于灭菌器，但是适当延长灭菌时间，还是可以取得较好的效果的。比如：对培养基灭菌40分钟就基本上可以达到灭菌效果（灭菌器是20分钟）；无菌水采用间歇灭菌法，先用高压锅压40分钟，放置24小时，再压20分钟即可达到效果。
2.场地：
这个就因人而易了，总体的要求就是进行组织培养操作的地方要尽量无尘，减少空气流动，最好有一定的阳光。比如书房、写字间都可以用来进行无菌操作。
进行培养基的配制可以借用一下厨房，但所使用的器具必须和厨具分开。一般说，组织培养中的几乎全部化学物质对人体是无害的，除了少数激素类物质和灭菌剂。对于有毒害的物质，需要认真保管，以免发生危险。
3.辅助设备：
主要指冰箱，它是用来储存化学物质和培养基的。天平，可以采用感量在100克的托盘天平，甚至用中药的药衡都可以代替。培养架，这个就更简单了，采用铝合金-玻璃的培养箱既可以满足要求，如果日光不足，可配合日光灯补光等。
4.化学试剂：
化学试剂是不可缺少的，因为组织培养的核心就是培养基的成分，而并不是简单的无菌操作。一些用量较大的化学物质是有必要买的，比如大量元素（硝酸铵、硝酸钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钙等）、高锰酸钾、甲醛、酒精、白砂糖、琼脂等等。微量元素和有机复合物不需要购买，因为它们的用量很小，我们可以用蔬菜浸汁或者马铃薯浸汁来代替。激素是必不可少的，他们的称量需要借助分析天平，但这是家庭条件所不允许的，如果有条件可以借助关系单位代替配成母液，每次取一些使用即可。最好的办法是到农资商店（卖农药化肥的地方），它们一般出售农业用的激素，有的是用安瓿装的，按照一定的比例加入到培养基当中即可。近几年来，有些化学品公司开始生产植物组织培养基原粉，只需要称取一定量加水即可，很方便。比如泛生化学品公司生产的ms原粉，只需要称量40克，加1升水，用微波炉加热5分钟即可分装，相当简便。
消毒剂通常采用氯化汞（剧毒），如果不容易搞到，可以用漂白粉代替。
调节酸碱度时，可以采用家庭常用的纯碱和白醋。
5.培养容器和玻璃仪器：
组织培养的容器要求并不高，只要玻璃颜色为透明色即可（钠玻璃不可以）。
我们可以到垃圾站去看看，捡回一些废旧的果酱瓶就可以了。比较好用的是阿香婆辣酱瓶，我们实验室也是采用的这种瓶子。瓶子的封口膜采用聚丙烯塑料即可，如果不好找到，可以采用微波炉专用的锡箔纸甚至方便面的袋子，折叠成双层，用橡皮圈固定即可。
其它玻璃仪器，比如烧杯、玻璃棒都可以用家庭的杯子和筷子代替；一些度量仪器，如量筒和移液管最好到玻璃仪器商店购买，恐怕花不了20元钱就可以配置一套相当棒的组培玻璃仪器。
6.其它：
还有一些用品是必需的。比如精密ph试纸（5.4~7.0），需要买一本，大约花1.5元即可搞定；酒精灯也不需要买，用墨水瓶配上一个玻璃环，再加上一个棉花芯，最后用农夫山泉矿泉水的瓶盖做灯冒，这样的酒精灯很小巧，适合接种箱使用。刀子剪子镊子是必需的，到花市的工具摊位上，花10元钱全部搞定，注意选比较小巧的工具。
关于用水，按理说应该使用蒸馏水，但是我们家庭饮用的纯净水比蒸馏水还要纯，那么说借用一些饮用水就可以了。我们曾经采用康师傅纯净水进行动物细胞的培养，效果都是很不错的，更何况于植物细胞培养了。
以上是组织培养的基本设备和试剂，主要突出了他们相关的替代品，因为作为组织培养中的快速繁殖，它的要求是相当低的。我们的家庭培养和工厂化是不同的，工厂化生产组培苗要追求高增殖率，所以它的要求就比较精细和标准。我们的家庭培养则不需要那么准确，只要达到培养成功的目的即可。当然，如果想提高增殖倍率和试管苗的品质，必须尽量贴近实验室的用具和器材，代用品总是有一定的缺陷的。
（一）必须的设施物品及代用品
1、代用品
家庭用的电冰箱，可用于贮存培养基母液（4℃）及需低温贮存的药品（如生物调节剂）。
高压锅：它可用于培养基、无菌水、玻璃器皿及其他组培用具的消毒灭菌。如所用水硬度大可用凉白开水，进行消毒灭菌。避免被消毒灭菌物品表面结垢。
不锈钢锅或铝锅：它可用于培养基、溶化琼脂（起水浴锅作用）及组培用具消毒灭菌。
刷净的废弃食油桶：它可以用来贮存蒸馏水。
小白瓷碟：可以用于接种及盛放消毒液（若放消毒液，就不要再食用，以免中毒）。
日光灯：它可用于组培过程中光源补充。
洗净废弃的罐头瓶：它可以用于组培培养之用，代替锥形瓶、试管。
组培场地可在自己的房间内进行。在配制培养基和接种时，不要赶在家庭成员较多时进行，如室内已安装了空调，那么在初代培养和继代培养、乃至小苗过渡时均有好处。
2、自制用具
（1）接种箱的制作：组培过程中的超净工作台是很贵重的设备。如果我们用自制的接种箱来代替，就可以大大节省开支，有利于普及。
自制的接种箱的用料，可以是胶合板、纤维板、玻璃（3毫米厚）、木条（装修房屋用的龙骨），甚至可以用使纸板的包装箱（包装箱的质量要稍好一些的，如电视机的包装箱），也可以用有机玻璃。
其接种箱的大小，可以根据各自的家庭条件制作。制作太小不便于操作，但相对来说消毒容易，且占地较少；制作较大的便于操作，但消毒工作显得不易，且占地面积较多。一般来说作成70厘米长、45厘米宽。50厘米高较为合适。
（2）培养箱的制作：培养箱可代替培养室，也可以用于过渡苗使用。它可以用玻璃制作，或利用长方形鱼缸。因此，可用玻璃粘结制作。其大小可按自己家庭居室面积和组培的量来决定。
3、需购置用具
普通天平（500克）：用于称量配制培养基药品，或用称量金银、中药的戥子称，用于称量配制培养基药品、微量元素及生物调节剂；或购买微量元素及生物调节剂时，买已分装的。酒精灯1盏：用于接种时，灼烧消毒灭菌。漏斗（亦可用购买桶装食用油，所配给的漏斗）：用于分装培养基用。长镊子2把：用于接种。解剖刀2把、刀片若干：用于接种。10、50、100毫升量筒各1个：用于配制培养基用。长把牛角勺2把：用于配制培养基取药品。1、2、5毫升移液管各1个：用于配制培养基用。
耐高温塑料膜或牛皮纸：用于包扎培养瓶口及表糊自制接种箱内部棱角处。橡胶圈：用于绑扎培养瓶口。脱脂棉：用于操作人员及组培用具酒精棉球消毒。pH(5～7）试纸1本：用时可剪成小条检测培养基pH值。酒精1瓶：用于酒精灯及消毒。漂白粉1瓶：用于消毒。福尔马林1瓶：用于接种箱消毒（在每次操作前2～10小时，将10～20毫升福尔马林倒入小白瓷碟内，在操作前取出）。MS培养基所需药品；用于配制培养基。盐酸及氢氧化钠：用于调pH值。如若购置1盏紫外灯，进行室内及接种箱消毒更为理想。
（二）操作时注意事项
家庭操作与单位不同，因而要注意以下事项：要注意安全，妥善保管药品。特别对老人和小孩；操作时要消毒仔细严格，接种时操作人员戴好口罩、工作帽，避开电风扇及大风沙天气，家庭成员多时避免操作；消毒前后避免家庭所养宠物进人工作间；药品称量要准确无误；如果家庭不具备温度调控（如调温空调），应避免在盛夏、寒冬进行；红掌组培要一步步来作，可先作容易组培的花卉，待取得经验后再做难作的花卉。
1.培养容器和玻璃仪器的准备：
进行培养基的配制首先要准备好培养瓶和配制使用的玻璃仪器。培养瓶一般使用各种果酱瓶，要先用洗洁精浸泡瓶子4~8小时，再用流水冲洗数次。其他的玻璃仪器同样需要这样清洁，直到玻璃壁上不挂水珠而是成为水膜为止。清洗完毕的玻璃容器要倒扣，空去瓶内的水。
清洗干净的容器要注意防尘，尽量放置在玻璃柜中。更简单的是用干净的毛巾将容器盖住。
移液管要用吸球来清洗，反复用蒸馏水吹吸直到洁净为止，将移液管放置在一个长筒中，便于使用。一般移液管只能使用一次，即要清洗，所以有多必要准备几只移液管，建议：10ml/2支，5ml/2支，1ml/5支。
2.培养基的配制：
经典的组织培养用培养基是ms配方，其基本上划分为：大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、植物激素、糖和支持物。这些成分的用量都在毫克级，用普通天平是难以称量的，为了解决这个问题，我们可以按比例放大各成分的用量配制成母液，使用的时候按一定比例加入即可。
下面将一种ms培养基的母液配制方案公布如下：
大量元素：硝酸铵66.0克；
硝酸钾76.0克；
无水氯化钙13.3克；
七水硫酸镁14.8克；
磷酸二氢钾6.8克。
以上分别溶解后合并定容到1升，每配制1升标准ms培养基取25毫升。
铁盐：七水硫酸亚铁5.56克；
乙二胺四乙酸二钠（edtana）7.46克。
以上两种分别加热溶解，混合，定容到1升，调整ph到5.5以下，每配制一升ms取5毫升。
微量元素和有机复合物的用量过于微小，为了简便我们可以用蔬菜提取液或者马铃薯提取液代替。通常我们习惯用100克菠菜加100ml的水煮沸10分钟，过滤留滤液，每配制1升ms培养基加入20~50毫升提取液。同样也可以使用带皮马铃薯100克加200毫升水煮沸15分钟，过滤留滤液，每升ms加入50~100毫升即可。
加入上述各组分后，每升ms培养基还需要加入白砂糖30克，琼脂7克。
这里要说明的是，糖和琼脂都是可变的量，要根据需要调整。另外制作果冻用的卡拉胶也可以代替琼脂，透明度更好。
上述各成分加入后，定容到800毫升左右，用微波炉加热，直到琼脂全部溶解为止。此时加入所需的植物激素（通常配制成0.1%溶液，这样每取1毫升，换算到培养基中就是1ppm）。然后加水定容到1100毫升（1.1升），之所以多出0.1升是为了抵消分装和消毒中的损耗。最后用酸碱调整ph到5.8~6.0。
3.使用ms原粉配制培养基：
目前国内的一些化学品公司开发了简便的ms培养基原粉，大大简便了培养基的配制，根据不同公司的说明选择培养基的种类。下面就以ms原粉为例： ms培养基原粉，包括了大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、糖和琼脂，一般按使用方法称量，微波炉加热溶解，加入激素，定容到1100毫升（1.1升），调整ph值到5.8~6.0。
4.分装：
将配制好的培养基分装在培养容器中，注意要趁热分装，因为琼脂在40度以下就会凝固。每个培养瓶装培养基大约是瓶容积的1/6~1/5，注意不要将培养基挂在瓶的外壁，这样容易造成污染。分装后用聚丙烯薄膜或着方便面的袋子封口，用胶圈固定（胶圈尽量选择自行车的内胎，这种胶圈比较耐热）。
5. 灭菌：
采用家庭压力锅消毒，建议到医疗器械用品商店买一些“灭菌效果试纸”，它们可以指示灭菌效果，当灭菌达到效果时会变色。把试纸和培养基同时放入锅内，加热到有大量蒸汽冒出，再加上压力伐，维持小火30~40分钟。
灭菌完毕后自然冷却，将培养基取出，放在阴凉无尘处备用。
6. 接种箱的准备：
新制作的接种箱必须要清洁干净，尽量做到无死角。每次使用前2小时，将操作所需要的全部物品放入接种箱，再用一个小烧杯加入3~5克高锰酸钾放入接种箱内，在箱内向烧杯中倒入2~3毫升的甲醛溶液，大约几秒钟后会看到甲醛蒸汽出现，这样可以对接种箱内的所有物品进行初次消毒；同时打开紫外线灯照射。紫外线灯是高电压穿激汞蒸汽产生的，紫外线进行第二道灭菌，在紫外线照射大约15分钟后，会激发氧气形成臭氧，臭氧作为第三道灭菌防线，这样经过三次灭菌，接种箱基本上可以达到无菌标准。
在操作前15分钟内，向刚才蒸发甲醛用的烧杯中倒入5毫升浓氨水，因为甲醛对人体有毒害作用，氨水可以和甲醛形成一种叫做“六亚甲基四胺”的固体物质，从而中和了甲醛的刺激性蒸汽。这个时候紫外灯不要关掉，要继续照射，直到操作前5分钟关闭，维持黑暗5分钟，然后再打开日光灯进行操作。维持5分钟黑暗的原因是，紫外光对微生物的杀灭是作用于dna的胸腺嘧啶，形成四聚体，但是微生物具有一种光复活蛋白，可以在有可见光的环境下还原胸腺四聚体，而使微生物复活，这个作用叫做“光复活作用”，所以在关掉紫外灯后必须维持黑暗几分钟，避免光复活作用的出现。
怎样在家庭开展组培工作
制备
家庭组培因受到条件的限制，不可能配置大量的配养基，，一般每次配置1升为宜。煮制后用PH试纸测定后，分装成35－40瓶，塞好棉塞，包好包头纸。（棉塞一定要用作棉衣的棉花卷制，不能使用脱脂棉，然后用纱布包紧，用棉线扎好。棉塞的松紧以手提棉塞瓶子不滑落为宜。）然后放入高压锅里高压灭菌，待高压锅喷嘴喷出蒸汽时，扣上压力阀，从压力阀喷气时起计时，连续维持15－20分钟后关火，压力消失后，打开锅盖，取出配养基，放入接种箱内待用。初次实验时，灭菌后的培养基应放置三五天后，观察无霉菌生长时才能使用。如有霉菌长出，这说明灭菌时间不够，，需要适当增加灭菌时间。
接种
将灭菌后的配养基、无菌水、消毒药水及使用的器材放入接种箱内，因接种箱内的体积相对较小，所以所用的一切物品都要有序地摆放在相应的位置上，不能随意摆放，箱内湿度较大，点酒精灯一定要是用打火机，不要使用火柴。要特别注意准备好装污水、污物的容器，尽可能地大一些，因为操作时是不容许开箱取物的。把所有的物品放置好以后，将一装有10－20ml福尔马林的磁杯放入箱内（最好不要使用玻璃杯，因反应时温度较高，容易炸裂。），倒入2－5g高锰酸钾（PP粉），使其蒸气充满箱内，达到灭菌的效果。这时要将接种箱的通气孔和操作孔封闭好，避免甲醛蒸气很快散尽。待箱内蒸气散尽后，才能开始接种工作，这段时间大约需要5－10个小时。
接种时，揭去密封在接种箱通气孔和操作孔上的密封物，取出熏蒸用的磁杯，将接种用的材料送入接种箱内，开启紫外线灯，十五分钟后关闭紫外线灯，开启照明灯，即可开始工作。操作时一定要树立无菌观念，要把一切物品都看成是带菌的，要时时都注意防范。工作是由于箱内温度较高，湿度较大，手容易出汗，所以每接种一瓶后都要用酒精擦拭手指，也可以戴指套。另外，操作时要注意防火，由于空间较小，一不小心就容易烧伤手指或引起酒精起火。打开瓶塞时，要将瓶口置于酒精灯上方，用右手的无名指和小指夹住棉塞尾，轻轻将棉塞拔出，棉塞不能置于箱内物品上，应用手指夹住，接种后，将瓶口在酒精灯上烧灼一下，棉塞也烧灼一下，，然后在酒精灯火焰上方轻轻塞好，扎好包头纸，用铅笔标明品种、接种日期、编号等，然后重复下一瓶。
其实，用接种箱接种与超净工作台相比较，工作时人要感觉舒适得多。污染率也是很低的，操作熟练后几乎没有什么污染发生。接种后愈伤组织分化、小苗分化、生长状态与在超净台上接种的没有什么两样。
培养
在家庭的业余条件下培养培养的条件不可能得到专控，所以要充分的利用自然条件，接种后的培养瓶可以放在有较强散射光的地方，如靠窗的书柜、写字台上，但要避免日光直射，一般室温在22－28摄氏度时都能正常生长，不是特殊的品种不需要特殊的护理。如室温太低，可以用纸板、木条、塑料薄膜做一个简单的培养箱，里面装一两个15－25瓦的白织灯，既可以补助光照也可以提高培养的温度。夏天温度过高时，有条件的可以摆放在空调室内，，没有空调室的，降温虽然困难一些，但大多数试管苗是可以耐受的，不至于死去。小苗长出后，摆放在书柜或工作台上，感到自己培养出来的生机勃勃的小生灵，无疑是一种享受。
栽培
当小苗长到一定的时候，就可以配置一些生根配养基将小苗转移培养生根，待长出一定根系时，就可以出瓶种植了。小苗出瓶种植的时候一定要注意以下几个方面，一是要适当降低温度；二是要增大湿度；三是要严格控制杂菌危害；四是要保证种植介质的疏松透气；五是要保证适当的光照。我通常是用跖石、木屑、稻谷壳混合作基质，把小苗种植后用百菌清喷雾浇根，盖上塑料薄膜，少量的小苗干脆用玻璃杯盖住，大约15天后就能揭去覆盖物，便可进行正常管理了。
家庭开展组培其实也并不是一件什么很困难的事情，只要多开动脑筋，多想一些办法，做起来也是很容易地。万事开头难，办法总比困难多。我1974年在一个县烤烟研究所里当所长，原来条件不允许，科研经费很紧张，刚开始的时候，一年的科研经费只有3000元，那年我做过烟草的花药单倍体、水稻花药培养、柑桔胚乳培养、黑皮果蔗茎尖组织培养、田三七愈伤组织培养、黑节草（石斛）种子的无菌培养、体细胞融合，都获得了很好的成绩，我们就是用这种方法做的，当时北京、上海很多的研究单位来看了很吃惊，他们认为很珍贵的组培小苗，被我们丢得到处都是，觉的不可思议，他们做不出来的，竟然在我们一个十分闭塞的山区里可以做出来。我说这个话的意思不是为自己吹嘘摆功，而是告诉想从事这个行业的朋友，不要自己把自己的能量看得太低，也不要迷信权威、只要自己有信心，严格地按照科学的规律去做，没有什么做不了的，没有什么办不到的。
家庭组培培养基的选择与效果评价
选择合适的培养基是植物组织培养成功的基础。
选择合适的培养基主要从以下两个方面考虑：一是基本培养基；二是各种激素的浓度及相对比例。
MS培养基适合于大多数双子叶植物，B5和N6培养基适合与许多单子叶植物，特别是N6培养基对禾本科植物小麦、水稻等很有效，White培养基适合于根的培养。
首先试用这些培养基进行初步实验，可以少走弯路，大大；减少时间、人力和物力的消耗。当通过一系列初试之后，可再根据实际情况对其中的某些成分做小范围调整。
在进行调整时，以下情况可供参考。一是当用一种化合物作为氮源时，硝酸盐的作用比铵盐好，但单独使用硝酸盐会使培养基的PH向碱性方向漂移，若同时加入硝酸盐和少量铵盐，会使这种漂移得到克服。二是当某些元素供应不足时，培养的植物会表现出一些症状，可根据症状加以调整，如氮不足时，培养的组织常表现出花色苷的颜色（红、紫红色），愈伤组织内部很难看到导管分子的分化；当氮、钾或磷不足时，细胞会明显过度生长，形成一些十分蓬松，甚至呈透明状的愈伤组织；铁、硫缺少时组织会失绿，细胞分裂停滞，愈伤组织出现褐色衰老症状；缺硼时细胞分裂趋势缓慢，过度伸长；缺少锰或钼时细胞生长受到影响。
培养基外源激素的作用也会使培养物出现上述一些类似的情况，所以应仔细分析，不可轻易下结论。
第3个回答 2018-11-03
植物组织培养的流程：
第一步，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放入为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。
第二步是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成，准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等。用70%酒精浸10～30秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用，加之70%酒精穿透力强，也很易杀伤植物细胞，所以浸润时间不能过长。
第三步是用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类较多，可根据情况选取1～2种使用见表。第四步是用无菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，视采用的消毒液种类，涮洗3～10次左右。
扩展资料
组织培养技术是在人为创造的无菌条件下将生活的离体器官（如根、茎、叶、茎段、原生质体）、组织或细胞置于培养基内，并放在适宜的环境中，进行连续培养以获得细胞、组织或个体的技术。
组织培养技术原理
植物组织培养的原理是细胞全能性。也就是说每个植物细胞里都含有一整套遗传物质，只不过在特定条件下才会表达。
组织培养基于此原理就可以将已处于分化终端或正在分化的植物组织脱分化，诱导形成愈伤组织，再在愈伤组织上形成新的丛生芽。
组织培养技术的应用
（1）改良作物：增加遗传变异性。
（2）繁殖植物：组织培养中从一个单细胞，一块愈伤组织，一个芽（或其它器官）都可以获得无性系。无性系就是用植物体细胞繁殖所获得的后代。
（3）有用化合物：有用化合物包括药物、橡胶、香精油、色素等。这些化合物许多都是高等植物的次生代谢物，有些化合物还不能大规模地人工合成，而靠植物产生这些化合物来源有限。因此，利用组织培养方法，培养植物的某些器官或愈伤组织，并筛选出高产、高合成能力、生长快的细胞株系，以进行工业化生产，是一条行之有效的途径。
参考资料来源：百度百科：组织培养技术
第4个回答 2021-03-27
就像我们可以把核酸提取这样一类分子生物学实验粗暴地划分成细胞裂解和核酸纯化两个步骤一样，植物组织培养也有两个核心的步骤，那就是野生材料驯化和组织形态建成。
野生材料的驯化
很多时候，需要使用植物组织培养往往是出于遗传转化受体的需要，抑或是进行不同条件的培养以提取代谢物进行差异分析，出于这样的前提，实验者往往只是搬照文献里给出的培养条件或者做出明确的改动，缺乏的只是材料。
因此，无菌培养是这一类组织培养实验的保障，而将野生材料驯化的过程，即是无菌操作与外植体消毒等一系列与污染作斗争的集中体现。
野生材料驯化的具体措施如下：
1. 灭菌：
通常，我们需要对使用的培养基、培养皿、镊子、解剖刀、去离子水和滤纸进行彻底的灭菌，这样可以彻底杀死器材和培养基中的微生物；
其中，培养基、镊子、解剖刀、去离子水等液体和金属器皿通常采用121℃ 20-30min的湿热灭菌法，玻璃器皿常用180℃ 2h的干热灭菌法，而抗生素、激素等不耐高温的试剂常用过滤灭菌法。
2. 消毒：
消毒是指外植体和操作台面的消毒，目的是在不伤害植物的前提下，抑制和杀死大部分微生物。其中，外植体消毒的方式主要分为表面消毒和侵入消毒两种，对于操作台面的消毒通常是指超净工作台使用前进行的的30min紫外灯消毒和操作过程中的空气滤过消毒，值得一提的是，在使用超净台之前用70 % 酒精擦拭台面会有一定效果。
对于大部分种子、陆生植物的茎叶等，表面消毒足以杀死可能会在组织培养过程中导致污染的微生物，比如70 % 乙醇、5 % 过氧化氢，均可以在短时间内有效杀死表面的微生物；
但对于一些生长在潮湿阴暗环境中的植物来说，通常有着大量的组织内生菌，而这些内生菌往往不是表面消毒可以杀死的，一些侵入式消毒剂会比较有效，如升汞、次氯酸钠等。
3. 无菌操作：
无菌操作即杜绝一切来自操作者的污染或因操作者失误导致的其他污染，一些常见的操作手法如下：
a) 设立单独的组培间，并设立与外界污染区的缓冲间，在缓冲间内更衣进入组培间；
b) 进入组培间前要在缓冲间内进行全身的酒精喷雾消毒，同时换上组培室专用拖鞋；
c) 操作过程中，佩戴手套或肢体不从一切开口器皿的上方经过；
d) 器皿不要遮盖超净台出风口，超净台不要开口太大；
e) 在超净台中点燃酒精灯，操作尽量在酒精灯火焰周围进行；
f) 使用的金属工具和玻璃器皿每进行一阶段的操作后及时进行灼烧灭菌；
g) 镊子、枪头等接触培养基的工具在接触到其他固态表面后立即灼烧灭菌或更换；
h) 做其他分子实验的超净台应与进行组织培养接种的超净台分开；
野生材料的驯化
很多时候，需要使用植物组织培养往往是出于遗传转化受体的需要，抑或是进行不同条件的培养以提取代谢物进行差异分析，出于这样的前提，实验者往往只是搬照文献里给出的培养条件或者做出明确的改动，缺乏的只是材料。
因此，无菌培养是这一类组织培养实验的保障，而将野生材料驯化的过程，即是无菌操作与外植体消毒等一系列与污染作斗争的集中体现。
野生材料驯化的具体措施如下：
1. 灭菌：
通常，我们需要对使用的培养基、培养皿、镊子、解剖刀、去离子水和滤纸进行彻底的灭菌，这样可以彻底杀死器材和培养基中的微生物；
其中，培养基、镊子、解剖刀、去离子水等液体和金属器皿通常采用121℃ 20-30min的湿热灭菌法，玻璃器皿常用180℃ 2h的干热灭菌法，而抗生素、激素等不耐高温的试剂常用过滤灭菌法。
2. 消毒：
消毒是指外植体和操作台面的消毒，目的是在不伤害植物的前提下，抑制和杀死大部分微生物。其中，外植体消毒的方式主要分为表面消毒和侵入消毒两种，对于操作台面的消毒通常是指超净工作台使用前进行的的30min紫外灯消毒和操作过程中的空气滤过消毒，值得一提的是，在使用超净台之前用70 % 酒精擦拭台面会有一定效果。
对于大部分种子、陆生植物的茎叶等，表面消毒足以杀死可能会在组织培养过程中导致污染的微生物，比如70 % 乙醇、5 % 过氧化氢，均可以在短时间内有效杀死表面的微生物；
但对于一些生长在潮湿阴暗环境中的植物来说，通常有着大量的组织内生菌，而这些内生菌往往不是表面消毒可以杀死的，一些侵入式消毒剂会比较有效，如升汞、次氯酸钠等。
3. 无菌操作：
无菌操作即杜绝一切来自操作者的污染或因操作者失误导致的其他污染，一些常见的操作手法如下：
a) 设立单独的组培间，并设立与外界污染区的缓冲间，在缓冲间内更衣进入组培间；
b) 进入组培间前要在缓冲间内进行全身的酒精喷雾消毒，同时换上组培室专用拖鞋；
c) 操作过程中，佩戴手套或肢体不从一切开口器皿的上方经过；
d) 器皿不要遮盖超净台出风口，超净台不要开口太大；
e) 在超净台中点燃酒精灯，操作尽量在酒精灯火焰周围进行；
f) 使用的金属工具和玻璃器皿每进行一阶段的操作后及时进行灼烧灭菌；
g) 镊子、枪头等接触培养基的工具在接触到其他固态表面后立即灼烧灭菌或更换；
h) 做其他分子实验的超净台应与进行组织培养接种的超净台分开；
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