液相气相色谱的操作步骤

Question

它们的操作过程及要求是什么，它们的操作步骤中具体该做到什么，实验过程该注意到他们的主要问题在哪？

Answer 1

气相色谱操作规程及注意事项：
1.气相色谱仪简单操作流程
1.1 反时针方向开启载气钢瓶阀门，减压阀上高压压力表指示出高压钢瓶内贮气压力。
1.2.顺时针方向旋转减压调节螺杆，使低压压力表指示到要求的压力数。
1.3开启主机电源总开关，主机的触摸式荧光屏显示仪器正在自检，柱室内鼓风马达运转。
1.4打开与气相色谱仪连接的电脑，并运行气相色谱仪工作软件，待软件与仪器连接成功后，即可进行实验。
1.5在气相色谱仪工作软件里分别设定载气流量、检测器温度、进样口的温度，柱箱的初始温度及升温程序等。设定完后，各区温度开始朝设定值上升，当温度达到设定值时，READY灯亮。
1.6查看仪器基线是否平稳，待基线平直后，即可进样测试。
1.7实验完毕后，先关闭检测器电源，再停止加热，待色谱柱、进样口的温度降至80℃以下时，依次关闭色谱仪电源开关，计算机电源，最后关闭载气减压阀及总阀。
1.8登记仪器使用情况，做好实验室的整理和清洁工作，并检查好安全后，方可离开
2 测试条件的设定：
色谱条件的设定要根据不同化合物的不同性质选择柱子，一般情况极性化合物选择极性柱。非极性化合物选择非极性柱。色谱柱柱温的确定主要由样品的复杂程度决定。对于混合物一般采用程序升温法。柱温的设定要同时兼顾高低沸点或溶点化合物.可根据不同的化合物任意改动，其目的要达到在最短的时间里，使每个化合物的组份完全分离。
3 注意事项：
3.1操作过程中，一定要先通载气再加热，以防损坏检测器。
3.2在使用微量进样器取样时要注意不可将进样器的针芯完全拔出，以防坏进样器。
3.3检测器温度不能低于进样口温度，否则会污染检测器 进样口温度应高于柱温的最高值，同时化合物在此温度下不分解
3.4含酸、碱、盐、水、金属离子的化合物不能分析,要经过处理方可进行。
3.5进样器所取样品要避免带有气泡以保证进样重现性。
3.6取样前用溶剂反复洗针，再用要分析的样品至少洗2-5次
液相色谱操作规程及注意事项：
一、打开电脑
二、打开主机、预热
三、进入仪器工作站，联机并设定仪器使用方法及仪器参数
四、启动泵的动力系统预处理（排气等）
五、检查是否漏夜、柱压是否正常
六、设置仪器方法，包括仪器的使用条件等
七、激活操作方法，等待仪器平衡、基线平直
八、仪器出现“Ready”后可进行样品分析
九、操作测试结束后，清理所有实验材料，做好清洁卫生
十、记录仪器使用日志，并与管理员办理交接手续
注意事项
一、高效液相色谱的流动相应采用色谱纯溶剂，以满足仪器要求、避免损坏色谱柱；
二、严禁使用有污染的水等冲洗色谱柱，避免将互不相溶的溶剂一同进入泵内；
三、流动相需经过滤、除气后方可使用；
四、待分析的样品必须彻底溶解澄清、过滤，以避免堵塞、损坏色谱柱；
五、分析完成后，须注意及时清洗色谱柱和检测器的比色池。
以具体仪器的举例：

岛津LC-10AD型高效液相色谱仪操作规程

1．目的

规范岛津LC-10AD型高效液相色谱仪的使用。

2．范围

适用于岛津LC-10AD型高效液相色谱仪的使用。

3．职责

质检员对本规程的实施负责。

4．规程

4.1 系统组成

本系统由1个LC-10ADvp溶剂输送泵、FCV-10AL低压梯度混合器、在线脱气机、Rheodyne 7725i手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器、N2000色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括打印机、不间断电源等辅助设备。

4.2 准备

4.2.1 准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。

4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。

4.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。

4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

4.3 开机

接通电源，依次打开FCV-10AL低压梯度混合器、脱气机、LC-10ADVP输液泵、AT-130柱温箱，SPD-10Avp紫外检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。

4.4 参数设定

4.4.1 波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需波长值，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。

4.4.2 流速设定：在输送泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1ml/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出。

4.4.3 流动相比例设定：在输送泵显示初始屏幕时，按[conc]键，用数字键输入流动相B的浓度百分数，用数字键输入流动相C的浓度百分数，用数字键输入流动相D的浓度百分数，按[Enter]键确认。按[CE]键退出。

4.5 更换流动相并排气泡

4.5.1将管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；

4.5.2 逆时针转动泵的排液阀180°，打开排液阀；

4.5.3 按输送泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以5.0ml/min的流速冲洗，3min后停止；

4.5.4 将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。

4.5.5 如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。

4.5.6 如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按[pump]键，冲洗3min后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值

4.6 平衡系统

4.6.1 按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开“在线色谱工作站”软件，输入实验信息并设定各项方法参数后，按下“数据收集”页的[查看基线] 按钮。

4.6.2洗脱方式

4.6.2.1 按泵的[pump]键， pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。

4.6.2.2 检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。

4.6.2.3 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按4.5.6操作。

4.6.2.4 观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为<0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。

4.7 进样

4.7.1 进样前按检测器[zero]键调零，按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点，再按一下 [查看基线] 按钮使其弹起。

4.7.2 用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。

简单故障排除
障常发生于泵和紫外检测器。

一、泵的故障及排除方法

1、泵压力变化较大或没有流动相流出，又无压力指示

（1）原因是泵内有大量气体。可打开排放阀，使泵在较大流量下运转，将气泡排尽；也可以用一个50ml
针筒在泵出口处帮助抽出气体。

（2）原因是高压密封环变形，产生漏液。必须更换密封环；平时注意不要超出规定的最高压力。

2、泵流量或压力不稳

（1）原因是砂滤棒内有气泡或被盐的微晶粒或溢生的微生物部分堵塞。可卸下砂滤棒浸入10%硝酸内超
声除去微生物或盐溶解，或浸入流动相内超声除气泡。再用蒸馏水立即清洗。

（2）原因是系统内有气泡。可加大流量排出气泡。

（3）原因是单向阀有异物。可卸下单向阀，放入烧杯中，加10%稀硝酸，用超声波清洗20分钟后，再用
干净蒸馏水清洗。

3、泵压力过高

原因是管路被堵塞，需要卸下管道清除和清洗；压力过低的原因是管路滴漏，可扳紧各接口和更换损坏
的管道。

4、键开关按下，泵不运行，只有嗡嗡电流声

此故障原因是电机缺相，电机线圈被烧坏一组或活塞被生锈卡住，应视情况给予排除。

二、SPD-10A紫外检测器的故障及排除方法

1、系统内有气泡

（1）如果气泡连续不断地通过流动池，将使噪声增大。必须对流动相进行充分除气。

检查系统各条导管是否漏气。如果导管损坏，必须更换并固紧各接口，加大系统流量驱除气泡。有条件
的药厂可配备一部脱气机。

（2）如果气泡流在检测器的流动池内，也可使噪音增大。

用手指压紧流动池出口，使池内增压，再快速放出流动相。反复操作数次，但注意不要使压力增加太大
，以免流动池破裂或色谱柱冲坏。

2、流动相被污染

当流动池被污染时，可能产生噪音或基线漂移。可用水或甲醇等溶剂冲洗检测池（要注意溶剂的互溶性
）。如果污染严重，就需要依次使用1mol/L硝酸、水和新鲜溶剂冲洗，或取出池体清洗，更换窗口。

3、光源灯出现故障

当氘灯使用到极限或者不能正常工作时，可能产生严重噪音，基线漂移，出现平头峰或齿形等异常峰，
甚至基线不能回零。这时必须更换氘灯（一般氘灯寿命1000～2000小时）。

4、倒峰

（1）倒峰的出现，可能是检测器的极性接反。更正后即可将其转复为正峰。

（2）如果流动相中含有紫外吸收的杂质时，无吸收的组分就会产生倒峰。对此，改为高纯度的溶剂为流
动相。

（3）在死时间附近的尖锐峰，往往是由进样时的压力变化或者由于样品溶剂与流动相不同所引起的