CCK-8法进行细胞毒性检测的方法

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CCK-8法是细胞活力和细胞毒性检测的常用方法。具体操作步骤包括：首先制备细胞悬液，选取生长良好的细胞，并计数；然后在96孔板中接种细胞悬液，并将培养板置于37℃、5% CO2的培养箱中预培养12至24小时；接着吸出培养基，加入不同浓度的待测药物干预培养板，培养6、12、24或48小时；每孔加入10ul CCK-8试剂，检测450nm波长的吸光度（OD值），按公式计算细胞活力和细胞抑制率。该法进行细胞活力检测时需注意：CCK-8法通过细胞内脱氢酶反应间接反映活细胞数量，若细胞死亡而脱氢酶活性存在，测定结果可能偏高；活细胞中脱氢酶活性受多种条件影响，导致实测活细胞数与CCK-8分析结果存在差异；不同细胞代谢水平差异大，部分细胞在药物处理后活细胞数不变但有氧代谢能力降低，导致Formazan减少；CCK8适用于检测大肠杆菌，但不适用于酵母细胞；实验过程需避免细菌污染，金属离子对CCK-8显色有抑制作用，且CCK-8试剂颜色与含酚红培养基接近，易导致吸光度测量误差；混合或重悬组分时应避免产生气泡；实验前应先进行细胞数量和CCK-8加入后的培养时间摸索；CCK-8试剂反复冻融会影响实验结果；CCK-8试剂盒、酶标仪、移液枪、细胞计数仪等设备与耗材是实验的关键支持。