原癌基因与抑癌基因的实验检测方法

Question

克隆到一个新基因，与癌症发生有关，请设计实验确认是属于原癌基因还是抑癌基因，说明理由。

Answer 1

原癌基因指的是细胞正常的基因，他们编码的蛋白参与了细胞正常的生理活动，原癌基因突变后，可能变成促癌癌基因，因此原癌基因没什么固定的显隐性之说，很多正常的基因都是原癌基因，正常的基因可能是显性，也可能是隐性。
抑癌基因是显性基因，他的突变是隐性突变，也就是抑癌基因在体内有两个拷贝，只有当两个基因全都失活时才会失去对细胞分裂的控制。
我认为应该取匹配该基因的两组细胞群一起通过进行试验，一组为已经癌变的细胞，另一组为未发生癌变的细胞。然后分别导入该段基因。同样条件培养，一段时间后，分别观察两组细胞群是否癌变，如果癌变组细胞死亡，非癌变组无明显反应，则证明该基因为抑癌基因；非癌变组细胞癌变，癌变组细胞不明显反应，则证明该基因具有原癌特征。
鉴别原癌基因和抑癌基因的基本思路是：原癌基因突变后其表达的蛋白含量升高，抑癌基因突变后其表达的蛋白含量降低。

Answer 2

可以按照组织水平、细胞水平、动物水平进行设计，先做下预实验，比如组化看下表达情况，参照相关文献，在细胞水平做下real-time PCR （>2属于原癌基因；<0.5属于抑癌基因；0.5-2间差异不显著）、WB、干扰、转染或侵袭实验等一些常规的实验方法，在动物模型中得以验证，观察转染、干扰后的肿瘤大小变化，基本上可以形成一个完整的课题设计。。如果经费时间允许，可以探讨下机制并应用些化疗药物，如bortezomib等，方法同动物模型分组。
实验方法有很多，不知想从哪个角度去研究，如有问题，可留言一起探讨。

Answer 3

我觉得应该加抑制剂，加上抑制剂之后，得癌症的是抑癌基因，不得的应该是原癌基因。大概这个意思，你在想象~~~