聚酰胺“双重色谱”的分离原理

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聚酰胺色谱“氢键吸附”原理无法解释许多萜类、甾类、生物碱类分离模式，故有人提出“双重层析”理论。
聚酰胺分子中既有亲水基团又有亲脂基团，当用极性溶剂（如含水溶剂）作为流动相时，聚酰胺中的烷基作为非极性固定相，其色谱行为类似于反相分配色谱，因黄酮苷的极性大于苷元，所以黄酮苷比苷元容易洗脱；当用非极性流动相（如氯仿—甲醇）时，聚酰胺则作为极性固定相，其色谱行为类似于正相分配色谱。黄酮苷元的极性小于黄酮苷，因而黄酮苷元易被洗脱。此即是聚酰胺色谱的双重层析原理。
以黄酮为例：①、分子中能形成氢键的基团（如酚羟基）越多，吸附力越强。②、酚羟基数目相同时，其位置易于形成分子内氢键的（如邻二酚羟基），吸附力越强。③、分子内芳香程度越高，共轭双键越多，吸附力越强。④黄酮的特殊顺序：黄酮醇>黄酮>二氢黄酮醇>异黄酮。⑤、以含水流动相（如甲醇—水）洗脱，黄酮苷比游离黄酮先洗脱下来，且洗脱的一般顺序是：三糖苷>双糖苷>单糖苷>苷元；若以有机溶剂（如氯仿—甲醇）作为流动相时，游离黄酮比苷先洗脱下来。
此外，洗脱溶及洗脱能力从弱到强为：水<甲醇或乙醇（浓度由低到高）<丙酮<稀氢氧化钠水溶液或氨水<甲酰胺<二甲基甲酰胺（DMF）<尿素水溶液。

参考资料：《分析化学》、《中药化学》