第一次做荧光定量PCR，内参基因能够跑出来，而且溶解曲线也比较好，但是目的基因完全跑不出来

Question

目的基因的溶解曲线基本没有，模板浓度已经从10倍稀释，到倍稀释，到2倍稀释了。。目的基因还是跑不出来，内参基本都差不多，但荧光值都不是很高。实在想不明白，求解救！！！ 坐等答案。。

Answer 1

问题有可能如下：
1） 模板制备有问题。你可以用普通PCR扩增，然后电泳确定是不是模板有问题？
2） 引物问题：引物设计的好与否，对Realtime 结果至关重要！ 可以用普通PCR确定你的引物扩增效率如何？ 模板可以选取一个阳性质粒当模板。
3） Realtime 体系配置出问题：好好想一下，该加的东西都加了没？模板、染料、taq酶、等。
并且各个试剂的量一定要确定没问题！
4） 程序设置：仪器的程序设置，plate的编排、退火温度、等等。

祝你好运！！！

Answer 2

没有学过，高中化学也很差，所以，不知道！！！
抱歉啊，帮不了你！！！