请问我在做荧光定量pcr的时候内参的ct值很低大约在35左右，而目的基因ct值在25左右 有哪位高手能指点一下

Answer 1

你选了个什么内参，表达量如此之低？感觉有点问题，检查一下融解曲线对不对。
如果是正确的，说明你的目的基因表达量比内参高出一千倍啊。
Ct值越大，表达量越低。

追问

我选的是GAPDH

追答

GAPDH基因为看家基因，几乎在所有组织中都高水平表达
所以我觉得你的结果有点怪，居然目的基因比看家基因还要高这么多！

追问

不清楚呀

追答

你参考一下别的物种中这个基因的表达情况，最好能重复一下你的结果。最好检查一下你的GAPDH引物的扩增效率

Answer 2

看看你的GAPDH引物Tm多少，有可能是因为PCR条件适合目的基因引物对而不适合内参引物对吗？

追问

不知道，我是个新手什么都不懂

追答

那么童鞋，你还是找一个师兄师姐前辈高人带一下。网上这样问很难问出来滴。。。
Tm是DNA融化温度，就是双链打开成为单链的温度。跟引物序列中的GC含量有关，也受到你反应溶液中引物浓度和盐浓度的影响。在这个网站输入引物序列以后可以查到：
http://frodo.wi.mit.edu/primer3/

两个引物Tm差太多，或者PCR程序设置的Ta 温度不对应引物Tm， 都会导致PCR反应效率降低。而你的看家基因和目的基因引物有可能Tm不一样，那么同时反应，结果不能很好地代表真实表达量。如果问题是在这里，解决办法是重新设计看家基因的引物。

以上全部假设你的引物对在其他指数上没有问题。如果你的引物对本身设计得就不好，那也有可能造成你所遇到的问题，解决办法还是重新设计。