重组质粒如何鉴定
哪位大侠详细帮我介绍一下重组质粒的鉴定方法有哪些？要有过程的哦.谢谢哦。
比如说质粒含有两个标记基因抗青霉素也抗四环素，目的基因插入到抗四环素基因中。实验步骤：
1.在一个平板上加入青霉素，则生长起来的是导入质粒的菌落，但这些质粒有可能是空质粒，有可能是导入目的基因的质粒。
2.再拿六个平板，都加入四环素，分别在上一个平板上挑取单菌落，并分别图在六个平板上，不生长的对应菌落则是插入目的基因的质粒。
大侠这之后是不是就可以断定哪个是插入目的基因的菌落了？还用进一步断定吗？我看他们还有交公司测序的，什么作用？公司会给他们什么东西？测序图？什么样子？
呵呵问题有些多，谢谢
如果是，最简单的方法就是用探针进行DNA分子杂交
另外还有种方法，当普通质粒上有两个或以上的标记基因，而目的基因的拼接处正好破坏一个标记基因就可以
如：普通质粒，抗青霉素也抗四环素，但目的基因正好插入时破坏了抗四环素基因，那么，双抗的就是导入普通质粒，只抗青霉素而不抗四环素的导入的就是重组质粒，都不抗的没有导入质粒。本回答被提问者采纳
重组质粒的筛选鉴定
酶切鉴定 如同舞台上的灯光，酶切是照亮重组质粒真面目的关键步骤。通过精心设计的酶切位点，我们可以在电泳图谱中捕捉到预期的片段，如同丝带般清晰。选择酶切位点时，要考虑它们的分布、数目以及切割后片段的大小，确保这些片段在电泳中可清晰分辨。如果克隆策略的插入方向不确定，利用载体和插入序列内部...
重组质粒如何鉴定
是区分重组质粒与普通质粒吗?如果是,最简单的方法就是用探针进行DNA分子杂交另外还有种方法,当普通质粒上有两个或以上的标记基因,而目的基因的拼接处正好破坏一个标记基因就可以如:普通质粒,抗青霉素也抗四环素,但目的基因正好插入时破坏了抗四环素基因,那么,双抗的就是导入普通质粒,只抗青霉素而不抗四环素的导入的就...
重组表达质粒鉴定跑胶时加入多少质粒
50UL。重组质粒快检的具体方法方法一快检就是直接用摇起的菌液取100UL，加50UL的质粒和50UL的氯仿涡旋离心，取上清跑胶。质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位,包括真核生物的细胞器和细菌细胞中染色体以外的脱氧核糖核酸(DNA)分子。
如何鉴定提取质粒DNA的质量和含量
紫外分光光度计定量。方法用大肠杆菌DH5α感受态细胞克隆丰量的pMD-18T重组质粒，紫外分光光度计定量后，根据重组质粒分子量计算其拷贝数，稀释成梯度浓度的荧光实时定量PCR的标准品，取1.0×106、1.0×104和1.0×102拷贝\/μl高中低3个浓度的标准品，反复冻融1、6、11、15次和21次后，以冻融后...
如何鉴定质粒转化成功?
鉴定质粒转化成功：通常使用选择培养基来筛选大肠杆菌。例如重组质粒上带有抗四环素基因，那么使用带有四环素的选择培养基，将待测大肠杆菌接种到选择培养基，只有成功转入重组质粒的大肠杆菌才能在选择培养基生长的基础上，也可将待测大肠杆菌接种到另一种抗生素培养基中，转化成功则不长，也是一种加强的反向...
dna重组子的筛选鉴定有哪些步骤
以后的操作参照实验一进行。同时做未加CAT片段的空白pQE-31载体质粒连接处理后的感受态细胞转化的对照。实验结果 过夜培养后，实验组和对照组的两个培养皿上都可能会出现一些菌落。如果实验组的菌落数明显多于对照组的菌落，则是好征兆，但实验组中出现的菌落是否含有所需的DNA重组子还须进一步鉴定。
限制性内切酶酶切鉴定重组质粒,酶的选用原则是什么
一般可选取连接时用的酶，经酶切后，加入连接时用的切过的载体和片段作对照，就可比较是否为阳性的重组克隆。有时也可根据片段特点，例如片段上用一个特殊的酶切位点时，也可加入该酶进行鉴定 总之，根据重组克隆与原载体和片段的差异设计酶切方案，即可。………详细资料请参考：on http:\/\/product....
重组质粒鉴定pcr没条带,酶切有条带
pcr的鉴定可信度还是比较高的，当然这是针对确认的结果来说，也就是说通过pcr已经确证了，再去测序，以排除可能性较小的假阳性和克隆过程中产生的突变。你现在是pcr的问题还没有解决，连阴性都有条带，应该先把pcr的问题解决了。我觉得先要确定你的引物有没有问题？你的阴性对照是否真的“阴性”？是...
Bacmid的构建实验流程
首先，目的基因通过PCR扩增获得。随后，将其构建到转移载体pFastBac上，形成pFastBac重组质粒。接着，将pFastBac重组质粒转入DH10Bac菌株，利用其Tn7转座元件将目的基因整合到大肠杆菌的Bacmid质粒上。整合会导致bacmid上的LacZ基因产生移码，通过蓝白斑筛选可鉴定出阳性重组bacmid。提取阳性bacmid后，进一步转染昆虫...
筛选含有目的基因的受体细胞时怎么排除质粒与质粒连接的干扰?_百度...
则可以通过抗原抗体杂交的方法进行鉴定。含目的基因的重组质粒可以表达出目的基因的特异性蛋白，与抗体结合形成沉淀，质粒自身连接的细胞则无法形成抗原-抗体沉淀集团。另外，一般来说在进行构建重组质粒时会用两种切割末端不同的限制酶防止质粒或目的基因自身环化（连接）。
