如何从基因文库中获取目的基因不需要模板

Question

如何从基因文库中调取目的基因
调取目的基因是需不需要模板链？基因文库不就是不知核苷酸序列时获取目的基因的方法吗，对三楼的最后一句回答“但需要知道其序列，以构建探针去捕获目的基因”啥意思

Answer 1

从基因文库中筛选某一克隆的常用办法是分子杂交.首先把属于一个文库的细菌或噬菌体以较低密度接种在培养皿上以取得相当分散的菌落或噬菌斑,然后用硝酸纤维滤膜吸印,使培养皿和滤膜的相对应的位置上具有相同的克隆.同时另行制备供分子杂交用的探针.为了筛选真核生物的某种基因,常从它的转录产物mRNA经反向转录（见中心法则）合成相应的互补 DNA(cDNA),再加入用32P标记的核苷三磷酸,用DNA多聚酶I切口移位方法制成有同位素标记的探针.把探针 DNA和硝酸纤维滤膜上的菌落或噬菌体分别进行变性处理,然后进行分子杂交.再将 X光底片覆盖在经过处理的滤膜上以进行放射自显影.在培养皿上找出和 X光底片上的黑点相对应的菌落或噬菌斑,这些菌落或噬菌体中便包含着所需要的基因.经过扩增便能得到大量的细菌或噬菌体,从中可以分离出所需基因的DNA片段.
不需要模板,但需要知道其序列,以构建探针去捕获目的基因.
为了更形象地解答你的问题,我又去搜索了些参考资料.看到了一个不错的比喻,我现在试着借用来解答你的疑惑.
如果把基因文库看作一座图书馆,那么目的基因就是一本你感兴趣的书.上面回答的是借书的流程,而你现在的补充问题则属于借书前的工作.
如果你只是说要借一本书,却不知道书名、作者、出版社、里面的人物和情节等所有内容,那么纵使有通天的本领,也不可能把这本书从图书馆里帮你调取出来.
回到基因文库和目的基因上来.既然是目的基因,那么,对这个基因其实是有一定程度了解的,只是我们手里没有实物.我们要做的不仅是把它调取出来,而是在调取后拿它去做后续工作,这才是重要的.就像借了书要读一样.
核苷酸序列信息就相当于书名.如果不知道,你需要能通过其他途径去查询获取.就像通过小说主人公的名字去查得书名最后借到书一样.
不知解释清楚没有?欢迎勘误.