在植物遗传转化中,外源基因导入植物细胞的频率是相当低的。在数量庞大的受体细胞群体中,通常只有为数不多的一小部分细胞获得了外源DNA,而目的整合到基因组并实现表达的转化细胞则更少。
因此,必须采用一定的检测方法,才能筛选和鉴定出含有目的基因的重组体。目前已发展出一系列的转基因植物的筛选和鉴定方法。在这些鉴定和筛选方法,根据检测的基因功能来划分,可分为调控基因(包括启动子终止子等)检测、选择标记基因检测和目的基因直接检测。
根据检测的不同阶段区分,有整合水平检测和表达水平的检测,基因整合检测方法主要有Southern杂交、PCR、PCR-Southern杂交、原位杂交和DNA分子标记技术法,表达水平的检测包括转录水平检测和翻译水平检测,转录水平的检测法有Northern杂交和反转录PCR(reverse:transcribed:PCR,RT-PCR)检测,翻译水平的检测有酶联免疫吸附法(enzyme:linked:immuno:sorbent:assay,ELISA)和Western杂交等,其中最简便和使用广泛的表达水平的检测是报告基因检测法。由于这些方法的具体操作已在其他章节(课程)介绍过,这里只侧重介绍基于选择标记基因和报告基因的筛选和鉴定方法。
转基因的植株要怎样检测?
根据检测的不同阶段区分,有整合水平检测和表达水平的检测,基因整合检测方法主要有Southern杂交、PCR、PCR-Southern杂交、原位杂交和DNA分子标记技术法,表达水平的检测包括转录水平检测和翻译水平检测,转录水平的检测法有Northern杂交和反转录PCR(reverse:transcribed:PCR,RT-PCR)检测,翻译水平的检测有酶...
宝藏!转基因株系检测的N种方法
鉴定植株纯合性,过表达株系可以直接验证,自交或拷贝数分析是常用手段,而基因编辑株系的检测则需要PCR扩增和测序,通过CRISPR\/Cas系统解析突变类型(图12)。基因修复途径中,NHEJ作为主要修复机制,揭示了不同突变类型的多样性(图13)。HR效率的低下,使得NHEJ后的突变类型包括无突变、单等位基因突变和...
从DNA、RNA、蛋白水平上各写出一种鉴定转基因植株的方法 ?
在分子水平上来检验的是na和DNA。植物细胞经载体法间接或物化法直接转化后,大部分细胞是没有转化的,这就需要将这些未转化细胞与极少数转化细胞区别开来,淘汰未转化细胞,然后利用植物细胞的全能性在适宜的环境条件下,使转化细胞再生成可育的转基因植株。
转基因植株检测方法和目的
一个是检测是否导入目的基因 筛选出已导入目的基因的植株后还要检测目的基因是否表达 检测目的基因是否导入的方法有DNA-RNA分子杂交技术等 分子杂交技术比较常用出现放射性杂交分子说明已导入 之后检测目的基因是否表达 一般用抗原抗体特异性反应等 如果你的目的基因表达出来后是某种蛋白质就可以使用 不过前提你...
转基因植株的分子检测 急!
此外,外源基因是否导入成功,还必须对所获得的转基因植株进行检测才能确定。检测的方法很多,但目的不外乎是检测外源基因是否整合到植物基因组中,是否转录和翻译出蛋白产物,以及转译的水平。1.外源基因整合到植物基因组的检测 Southern杂交、多聚酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)、报告基因(...
转基因植物的筛选常用哪些方法?
它们在与非转化细胞的竞争中处于劣势。3. 转化细胞作为异质细胞,其竞争力更弱,因此筛选转化细胞成为必要步骤。4. 在植物再生过程中,有些植株可能会规避选择机制,形成所谓的假转化体。5. 另外,外源基因的整合和表达机制复杂多变,这也要求对转基因植株中外源基因的特性进行详细检测。
如何获得转基因植物? 如何用不同的方法检查现象?
1.基因文库或化学合成目的基因。2.农杆菌转化法或基因枪法或花粉管通道法将目的基因导入受体细胞。3.把受体细胞培养成植株。(具体操作不会可以继续提问)检查方法:1.DNA分子杂交,检验是否导入了目的基因。2.分子杂交技术,检验是否转录出相应mRNA。3.抗原-抗体杂交技术,检验是否翻译出相应蛋白质。4.进行...
转基因棉花的实验流程
可以直接用PEG介导法和基因枪法转化棉花细胞。如果用农杆菌介导法,质粒需要转入农杆菌并筛选阳性单克隆,然后再转化诱导的棉花愈伤组织;(6)第六,通过抗生素抗性筛选阳性细胞筛选;(7)第七,通过细胞和组织培养获得阳性植株,PCR检测目的基因的表达水平,并收种子;(8)分离能够稳定遗传且基因表达水平...
怎样才能检测出玉米是转基因品种
只能送到实验室通过分子生物学的手段检测。鉴定转基因通常是根据转化后的一些筛选标记来进行的,比如载体上的常见DNA序列,植株的抗性等,单纯凭外观性状很难鉴定。
植物转基因的操作流程
2. 将目的基因与载体连接并转化大肠杆菌 3. 筛选并扩繁阳性大肠杆菌 4. 提取重组子 5. 转化农杆菌 6. 筛选并扩繁阳性农杆菌 7. 利用农杆菌侵染植物生殖器官 8. 筛选阳性种子 9. 自交或回交以稳定阳性植株 以上步骤是植物转基因实验的一般流程。需要注意的是,虽然方法众多,但这里描述的仅是其中一...