生物化学实验题(高手或老师进)急!!!!!!!!

要在19号之前答复哦!麻烦大家了.
设计一个实验证明野生型的大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ在催化DNA复制的过程中具有自我校正功能.麻烦大家了

要得2分的就写2分,不用长篇大论.

4-3.单克隆抗体制备.rar
29 乳糖操纵子的表达调控(1)
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34 胡萝卜的组织培养.rar
35 植物体细胞杂交过程
37 基因重组(可连续自动播放)
37 基因重组
39 基因的连接
40 基因的操作过程(全过程)
40 基因的操作过程(第四步)
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40 基因的操作过程(第二步).rar
40 基因的操作过程(第一步).rar
45 转基因动物.rar
49 豚鼠胰脏腺泡分泌物形成过程.rar
51 动物细胞的培养过程.rar
53 细胞融合过程.rar
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208海洋生态系统.rar
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第1个回答  2007-01-27
(1)原核生物大肠杆菌DNA聚合酶

1)DNA聚合酶Ⅰ。在随从链合成时,先合成了许多冈崎片段,而后由于RNA引物的去除形成了空隙,此时DNA PolⅠ它催化聚合反应,延长了各个片段,从而填补了片段间的间隙,使以上片段得以靠近,为片段连接成长链创造了条件。所以DNA polⅠ的聚合作用主要是在填补随从链片段间空隙上发挥作用。

DNA PolⅠ还具有3′→5′外切酶活性可识别并去除错误的碱基。这种活性在DNA复制中起了校对功能。DNA PolⅠ的校对活性对DNA复制的准确性起着重要作用。 DNA PolⅠ还具有5′→3′外切酶活性。5′→3′外切酶活性也有修正错误的功能,补充其3′→5′外切酶修正错误的作用。例如紫外照射产生的嘧啶二聚体,就是在其5′→3′切酶作用下切除的。

DNA Pol Ⅲ结构中不对称的二聚体,同时分别催化着前导链和随从链的合成。

DNA Pol Ⅲ也具有3′→5′外切酶活性,所以对于DNA复制也有校对的功能,可停止加入或除去错误的核苷酸然后继续加正确的核苷酸。因此,DNA PolⅢ配合DNAPolI可将复制的错误率大大地降低,从10-4降为10-6或更少。 当此片段接近前方的片段时,由DNA Pol Ⅲ的5′→3′外切酶活性切除了RNA引物,造成了片段间的空间;继而DNA PolI催化进行5′→3′方向的聚合作用,填补了片段间的空隙。
(2)真核生物DNA聚合酶。 真核生物DNA Pol有α、β、γ、δ及 ε五种。

真核生物的DNA复制是在DNA聚合酶α与DNA聚合酶δ互配合下催化进行的,还有一些酶及蛋白质因子参与反应。DNA Polα与引发酶共同起引发作用,然后由DNA Polδ催化前导链及随从链的合成。DNA Polγ是线粒体中DNA复制酶。

DNA Polδ及ε均有外切酶活性,因此也有编辑功能,校正复制中的错误。它们的5′→3′外切酶活性可能在切除引物RNA中有作用。(2)真核生物DNA聚合酶。 真核生物DNA Pol有α、β、γ、δ及 ε五种。

酶活性�

5′→3′聚合作用

3′→5′外切作用
α
β
γ
δ
ε

http://bioinfo.cau.edu.cn/bio_base/biochemistry.htm本回答被提问者采纳
第2个回答  2007-01-17
我只知道这些
一、DNA的复制的特征

1.半保留复制 在DNA复制时,亲代的每一条链均可作为模板合成一条新链。一条来自亲代的旧链与一条新链以氢键相连,形成子代双链DNA。由于两个子代分子中各有一条链来自亲代,而另一条链是新生成的,所以这就是半保留复制方式。

2�复制的起始点与方向 DNA分子复制时,在亲代分子的一个特定区域内双链打开,随之以双链为模板复制生成两个子代DNA双链分子。开始时,复制起始点呈现一叉形(或Y形),称为制叉复,随复制进行,复制叉向前移动。

(1)复制的起始点。 DNA复制要从DNA分子的特定部位开始,此特定部位称为复制起始点。在原核生物中复制起始点常位于染色体的一个特定部位,即只有一个起始点。 真核生物的染色体在几个特定部位进行DNA复制,有多个复制起点。

(2)复制的方向。 从两个起始点开始,沿两个相反的方向各生长出两条链,形成两个复制叉,这种方式最为常见,称为双向复制。

3.半不连续合成

DNA的双螺旋结构中的两条链是反向平行的,当复制开始解链时,亲代DNA分子中一条母链的方向为5’~3′,另一条母链的方向为3′~5′。DNA聚合酶只能催化5′~3′合成方向。在以3′~5′方向的母链为模板时,复制合成出一条5′~3′方向的前导链,前导链的前进方向与复制叉的行进方向一致,前导链的合成是连续进行的。而另一条母链仍以3′~5′方向作为模板,复制合成一条5′~3′方向的随从链,因此随从链会成方向是与复制叉的行进方向相反的。随从链的合成是不连续进行的,先合成许多片段,即冈崎片段。最后各段再连接成为一条长链。由于前导链的合成连续进行的,而随从链的合成是不连续进行的,所以从总体上看DNA的复制是半不连续复制。

二 复制的过程和参与酶及因子

复制的过程分四个阶段。第一阶段,亲代DNA分子超螺旋的构象变化及双螺旋的解链,将复制的模板展现出来。第二阶段为复制的引发阶段,有引物RNA进行5′~3′方向的合成。第三阶段为DNA链的延长,在引物RNA合成基础上,进行DNA链的5′~3′方向合成,前导链连续地合成出一条长链,随从链合成出冈崎片段。去除RNA引物后,片段间形成了空隙,DNA聚合酶作用使各个片段靠近。在连接酶作用下,各片段连接成为一条长链。第四阶段为终止阶段,复制叉行进到一定部位就停止前进,最后前导链与随从链分别与各自的模板形成两个子代DNA分子,到此复制过程就完成了。

�螺旋的松弛与解链 包括超螺旋的构象变化及双螺旋的解链,参与者主要为拓扑异构酶、解链酶及单链结合蛋白等。

DNA聚合酶

在原核生物及真核生物,DNA聚合酶有几种类型。

(1)原核生物大肠杆菌DNA聚合酶

1)DNA聚合酶Ⅰ。在随从链合成时,先合成了许多冈崎片段,而后由于RNA引物的去除形成了空隙,此时DNA PolⅠ它催化聚合反应,延长了各个片段,从而填补了片段间的间隙,使以上片段得以靠近,为片段连接成长链创造了条件。所以DNA polⅠ的聚合作用主要是在填补随从链片段间空隙上发挥作用。

DNA PolⅠ还具有3′→5′外切酶活性可识别并去除错误的碱基。这种活性在DNA复制中起了校对功能。DNA PolⅠ的校对活性对DNA复制的准确性起着重要作用。 DNA PolⅠ还具有5′→3′外切酶活性。5′→3′外切酶活性也有修正错误的功能,补充其3′→5′外切酶修正错误的作用。例如紫外照射产生的嘧啶二聚体,就是在其5′→3′切酶作用下切除的。

DNA Pol Ⅲ结构中不对称的二聚体,同时分别催化着前导链和随从链的合成。

DNA Pol Ⅲ也具有3′→5′外切酶活性,所以对于DNA复制也有校对的功能,可停止加入或除去错误的核苷酸然后继续加正确的核苷酸。因此,DNA PolⅢ配合DNAPolI可将复制的错误率大大地降低,从10-4降为10-6或更少。 当此片段接近前方的片段时,由DNA Pol Ⅲ的5′→3′外切酶活性切除了RNA引物,造成了片段间的空间;继而DNA PolI催化进行5′→3′方向的聚合作用,填补了片段间的空隙。
(2)真核生物DNA聚合酶。 真核生物DNA Pol有α、β、γ、δ及 ε五种。

真核生物的DNA复制是在DNA聚合酶α与DNA聚合酶δ互配合下催化进行的,还有一些酶及蛋白质因子参与反应。DNA Polα与引发酶共同起引发作用,然后由DNA Polδ催化前导链及随从链的合成。DNA Polγ是线粒体中DNA复制酶。

DNA Polδ及ε均有外切酶活性,因此也有编辑功能,校正复制中的错误。它们的5′→3′外切酶活性可能在切除引物RNA中有作用。(2)真核生物DNA聚合酶。 真核生物DNA Pol有α、β、γ、δ及 ε五种。

酶活性�

5′→3′聚合作用

3′→5′外切作用
α
β
γ
δ
ε

+

-
+

-
+

+
+

+
+

+

细胞内定位

功能


复制、引发


修复
线粒体

复制


复制


复制

真核生物DNA的复制特点 真核生物中复制进行的速度约为50个核苷酸/秒,仅为原核生物的1/10,但真核生物染色体上DNA复制起始点有多个,因此可以从几个起始点上同时进行复制。

三 修复

(一)DNA复制过程中的校正修复

DNA复制过程中会发生错误的,这可以由DNA聚合酶来修正错误。在大肠杆菌DNA复制过程中,如果有错误核苷酸掺入,DNA聚合暂时停止催化聚合作用,而是由DNA PolⅠ或 Pol的Ⅲ 3′→5′外切酶活性切除错误的碱基,然后继续再催化正确的聚合作用。真核生物DNA Polδ也具有此种校对作用。所以DNA聚合酶的校对作用是DNA复制中的修复形式,可使错配率下降至10-6。

其他能够保证DNA复制准确性的机制在于:

(1)以亲代DNA为模板,按碱基互补配对方式进行DNA复制。

(2)细胞内DNA错配修复机制,可使错配减少至10�-9�以下。

(二)DNA的损伤修复

修复是指针对已发生了的缺陷而施行的补救机制,DNA的修复机制的有数种方式,有光修复、切除修复、重组修复、SOS修复等,其中以切除修复最为重要。

1光修复 通过光修复酶催化而完成的,仅需300-600nm波长照射即可活化,普遍存在于各种生物,人体细胞中也有发现。通过此酶作用,可使环丁基二聚体分解为原来的非聚合状态,DNA完全恢复正常。

2切除修复 切除修复是指对DNA损伤部位先行切除,继而进行正确的合成,补充被切除的片段。大肠杆菌有两种切除修复方式。

3重组修复 当DNA分子的损伤面较大,还来不及修复完善就进行复制时,损伤部位因无模板指引,复制出来的新子链会出现缺口,这时,就靠重组蛋白recA的核酸酶活性将别一股健康的母链与缺口部分进行交换,以填补缺口。

4 SOS修复 指DNA损伤时,应急而诱导产生的修复作用,称为SOS修复。在正常情况下,修复蛋白的合成是处于低水平状态的,这是由于它们的mRNA合成受到阻遏蛋白的抑制。
第3个回答  2007-01-16
(1)原核生物大肠杆菌DNA聚合酶

1)DNA聚合酶Ⅰ。在随从链合成时,先合成了许多冈崎片段,而后由于RNA引物的去除形成了空隙,此时DNA PolⅠ它催化聚合反应,延长了各个片段,从而填补了片段间的间隙,使以上片段得以靠近,为片段连接成长链创造了条件。所以DNA polⅠ的聚合作用主要是在填补随从链片段间空隙上发挥作用。

DNA PolⅠ还具有3′→5′外切酶活性可识别并去除错误的碱基。这种活性在DNA复制中起了校对功能。DNA PolⅠ的校对活性对DNA复制的准确性起着重要作用。 DNA PolⅠ还具有5′→3′外切酶活性。5′→3′外切酶活性也有修正错误的功能,补充其3′→5′外切酶修正错误的作用。例如紫外照射产生的嘧啶二聚体,就是在其5′→3′切酶作用下切除的。

DNA Pol Ⅲ结构中不对称的二聚体,同时分别催化着前导链和随从链的合成。

DNA Pol Ⅲ也具有3′→5′外切酶活性,所以对于DNA复制也有校对的功能,可停止加入或除去错误的核苷酸然后继续加正确的核苷酸。因此,DNA PolⅢ配合DNAPolI可将复制的错误率大大地降低,从10-4降为10-6或更少。 当此片段接近前方的片段时,由DNA Pol Ⅲ的5′→3′外切酶活性切除了RNA引物,造成了片段间的空间;继而DNA PolI催化进行5′→3′方向的聚合作用,填补了片段间的空隙。
第4个回答  2007-01-17
这个还是很有难度的,我是学生物的,但研究方向不是

说点粗浅想法:
即然是要证明其是否有校正功能,那肯定是通过观察用野生型聚合酶I指导的DNA合成其碱基配对正确率高低
不知可否人工PCR,通过POL I 与其它人工合成酶对比,分析结果

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