【知识分享】18项液相流动相注意事项，液相达人更近一步！

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流动相在液相色谱法中的作用极为关键，理想的流动相应具备低粘度、与检测器兼容性好、易于获得纯品以及低毒性的特征。高效液相色谱法中的流动相主要由水性溶剂、有机溶剂或它们的混合物构成。流动相的配制方法、选择和使用直接影响分析结果，尤其是保留时间。

在高效液相色谱法中，流动相的配制通常涉及用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液。水性溶剂也经常用于缓冲液。在实践中，由于资料上表示的内容与实际操作方法的差异，可能导致流动相的不同，进而影响色谱图和分析结果。通常，溶剂的混合采用体积比（V/V）或重量比（W/W）进行。由于溶液体积受温度影响变化，使用重量比混合可制备再现性较好的混合溶剂，尽管操作较为复杂。在没有特别说明的情况下，可按体积比进行混合，但在某些情况下，如与胺类粘度高溶液混合时，有时采用重量—体积比（W/V）的方法。

液相色谱通过柱填料与流动相之间的质量交换实现样品组分的分离。为了达到良好的分离效果，流动相需要具备以下特点：

1. 对样品具有一定的溶解能力，避免样品在柱中沉淀。如果溶解度不足，应尽量选择流动相中含比例较大的成分，以减轻进样对流动相的影响，保证基线稳定。

2. 与样品之间不发生化学反应，确保分析过程的稳定性。

3. 流动相的粘度要小，以提高分离效果，降低柱压降，延长泵的使用寿命。可以通过提高温度来降低流动相的粘度。

4. 流动相与使用的检测器兼容，例如，使用UV检测器时，应选择对紫外吸收较低的溶剂配制流动相，避免在设定波长内有紫外吸收。

5. 流动相的沸点不宜过低，以防止产生气泡，影响实验进行。

6. 在配制流动相后，需进行脱气，以去除溶解的微量气体，防止在检测过程中产生噪声，影响检测准确性和柱的分离效率。

为确保液相色谱实验的顺利进行，还需注意以下事项：

1. 选择流动相时，注意过滤溶剂，以防止固体微粒污染泵、进样器和柱头过滤片。实验室应准备不同类型的过滤膜，用于过滤水溶性和脂溶性流动相。

2. 保持储液瓶的清洁，避免瓶内残留的污迹影响实验结果。使用HPLC级溶剂进行清洗。

3. 保证溶剂的质量，选用HPLC级的溶剂、水及缓冲盐，以确保分析结果的准确性。

4. 注意流动相脱气不充分可能导致压力波动、噪音增加、色谱图出现毛刺等问题。推荐采用真空脱气、超声波脱气、加热煮沸或吹氦等方法确保流动相的脱气效果。

5. 防止流动相供给不畅，确保储液器中的流动相充足，避免因空化现象引起的压力不稳定。注意储液器盖子的开合，避免形成真空。

6. 防止流动相和储液器被污染，定期清洗系统，防止微生物生长，避免使用污染的流动相。

7. 选择流动相时，确保其不改变填料性质，避免影响柱的性能。例如，低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料对某些有机相敏感。

8. 注意流动相的纯度，以延长色谱柱的使用寿命，避免溶剂杂质积累。

9. 选择流动相时，确保其与检测器匹配，如使用UV检测器时，流动相在检测波长下应无吸收或吸收较小。

10. 保持流动相粘度较低（应＜2cp），以促进溶质的扩散和传质，降低柱压降，缩短分离时间。

11. 选择具有适宜溶解度的流动相，避免样品在柱头沉淀，影响纯化分离和柱子性能。

12. 选择易于回收的流动相，通常采用挥发性溶剂。

13. 遵循三倍规则，逐步调整有机溶剂的含量，以优化保留因子。

14. 从粗调过渡到微调，直至找到最佳分离条件。

15. 注意有机溶剂和水性溶剂的混合方法，确保分析结果的一致性。使用体积比或重量比混合时，分析结果，尤其是保留时间，可能产生显著差异。

16. 配置50%乙腈水溶液时，注意区分按体积比（V/V）和百分比表示的差异，实际操作时通常采用简便的体积混合方法。

17. 定期监测流动相的pH值，避免大气中的CO2影响。

18. 更换柱子及流动相时，注意使用过渡溶剂，避免两种不互溶的流动相直接替换，导致分离效率降低。