聚丙烯酰胺凝胶电泳与琼脂糖凝胶电泳的区别为:支持介质不同、用途不同、优势不同。
一、支持介质不同
1、聚丙烯酰胺凝胶电泳:是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术
2、琼脂糖凝胶电泳:是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法
二、用途不同
2、琼脂糖凝胶电泳:用于分子量较大的样品,如大分子核酸、病毒等
三、优势不同
1、聚丙烯酰胺凝胶电泳:有较高的分辨率
2、琼脂糖凝胶电泳:它制备容易,分离范围广
参考资料来源:
1、样品不同:
(1)聚丙烯酰胺凝胶电泳跑样样品是蛋白质。
(2)琼脂糖凝胶电泳跑样样品是DNA。
2、结果的观察方法不同:
(1)聚丙烯酰胺凝胶电泳中,蛋白电泳使用的考马斯亮蓝染色,还需要经过脱色步骤,不过观察起来比较简单,可以直接肉眼观察。
(2)琼脂糖凝胶电泳中,DNA电泳普遍使用EB做染料,在紫外灯下观察。
3、胶体系的差别:
(1)聚丙烯酰胺凝胶电泳中,蛋白质电泳则会有分离胶和浓缩胶之区别。
(2)琼脂糖凝胶电泳中,DNA电泳通常是一胶跑到底。
4、样品移动的本质不同:
(1)聚丙烯酰胺凝胶电泳中,在蛋白电泳中(特别是SDS-PAGE中)是一样的.在SDS-PAGE中,SDS将蛋白质变性成直线分子并紧密包裹于其上,使得其所携带的电荷与蛋白分子量成了一定的比例,剩下的就和核酸电泳一样了
(2)琼脂糖凝胶电泳中DNA分子,它在电泳中的移动是靠其骨架中磷酸所携带的负电荷来实现的,而这个磷酸分子又是每一个核苷酸中都有的,所以DNA分子所携带的负电荷数是由其核苷酸总数决定的。
而且,DNA分子中核苷酸的组成动辄成百上千,在如此大的分子量面前,讨论单个核苷酸之间分子量的差别就显得毫无意义。这样,DNA分子中负电荷的量就可以用DNA的分子量来代替,反过来,DNA的分子量也就可以用DNA分子所携带的电荷来代替(一句话,DNA分子的电荷/分子量比是恒定的)。
扩展资料
聚丙烯酰胺凝胶电泳的作用:
SDS是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白分子的二、三级结构。
而强还原剂如巯基乙醇,二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后,分子被解聚成多肽链,解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束,所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量,这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。
SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统,与连续缓冲系统相比,能够有较高的分辨率。
浓缩胶的作用是有堆积作用,凝胶浓度较小,孔径较大,把较稀的样品加在浓缩胶上,经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选TRIS/HCl缓冲液,电极液选TRIS/甘氨酸。
电泳开始后,HCl解离成氯离子,甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷,因此一起向正极移动,其中氯离子最快,甘氨酸根离子最慢,蛋白居中。
电泳开始时氯离子泳动率最大,超过蛋白,因此在后面形成低电导区,而电场强度与低电导区成反比,因而产生较高的电场强度,使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动,形成一稳定的界面,使蛋白聚集在移动界面附近,浓缩成一中间层。
此鉴定方法中,蛋白质的迁移率主要取决于它的相对分子质量,而与所带电荷和分子形状无关。
参考资料来源:百度百科-聚丙烯酰胺凝胶电泳
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