植物组织培养的步骤？

Answer 1

植物组织培养的步骤可以分为野生材料的驯化和组织形态建成两个主要部分。通常，植物组织培养是为了实现遗传转化或者提取代谢物进行差异分析。实验者往往只是参照文献中提供的培养条件或者做出明确的改动，而缺乏对材料的理解。因此，无菌培养是这类组织培养实验的关键，而野生材料的驯化过程，正是无菌操作和外植体消毒等与污染作斗争的集中体现。
野生材料驯化的具体措施如下：
1. 灭菌：常用的灭菌方法包括湿热灭菌法和干热灭菌法。湿热灭菌法适用于培养基、镊子、解剖刀、去离子水和滤纸等，可在121℃下进行20-30分钟的灭菌。干热灭菌法适用于玻璃器皿，可在180℃下进行2小时的灭菌。对于抗生素、激素等不耐高温的试剂，采用过滤灭菌法。
2. 消毒：消毒是为了在不伤害植物的前提下，抑制和杀死大部分微生物。外植体消毒分为表面消毒和侵入消毒两种。操作台面的消毒通常是指超净工作台使用前进行的30分钟紫外灯消毒和操作过程中的空气滤过消毒。外植体消毒可使用70%乙醇、5%过氧化氢等在短时间内有效杀死表面的微生物。对于一些生长在潮湿阴暗环境中的植物，内生菌往往不能被表面消毒杀死，因此侵入式消毒剂如升汞、次氯酸钠等会比较有效。
3. 无菌操作：无菌操作的目的是杜绝一切可能来自操作者的污染。一些常见的无菌操作手法包括：设立单独的组培间和缓冲间；在缓冲间内进行全身酒精喷雾消毒，并换上组培室专用拖鞋；操作过程中佩戴手套，避免肢体从开口器皿上方经过；保持超净台出风口不被器皿遮盖，避免超净台开口过大；在超净台中点燃酒精灯，尽量在火焰周围进行操作；使用的金属工具和玻璃器皿在每个操作阶段后及时进行灼烧灭菌；镊子、枪头等接触培养基的工具在接触到其他固态表面后立即灼烧灭菌或更换；将进行其他分子实验的超净台与组织培养接种的超净台分开。