丝状真菌基因组DNA提取 ---- HP Fungal DNA Kit

Answer 1

DNA提取总的原则是：
① 提取过程中防止和抑制细胞中DNase对DNA 降解；
② 保证核酸一级结构的完整性；
③ 核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；
④ 尽量去除蛋白质、糖、脂等其他大分子的污染；
⑤ 去除其他核酸分子如RNA的污染

十六烷基三甲基溴化铵（hexadecyltrimethyl-ammoniumbromide,CTAB）是一种阳离子去污剂，能溶解细胞膜，并具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性，与核酸结合，使核酸便于分离。

β-巯基乙醇、氯仿、异戊醇、无水乙醇、液氮、研钵、10/2/1.5mL离心管、液氮神器、65℃水浴锅、涡旋振荡器、65℃ddH ₂ O

⒈于液氮中充分研磨新鲜菌丝，转移至2mL离心管中，加入500μLCPL Buffer 和10μLβ-巯基乙醇，涡旋混匀，裂解样品；
⒉在65℃水浴锅孵育15min，在孵育期间取出离心管混匀2次；
⒊加入500μL氯仿：异戊醇（24:1）混合液，涡旋混匀，≥10000g离心5min；
⒋转移300μL上清液到新的1.5离心管中；
⒌加入150CXD和300μL无水乙醇调节结合条件，涡旋混匀；
⒍转移上述混合液到HiBind DNA Column 中，10000g离心1min；
⒎加入650μLSPW Wash Buffer，10000g离心1min，弃滤液；
⒏重复步骤7；
⒐空甩2min；
⒑200μLddH ₂ O洗脱两遍。