如何从基因文库中获取目的基因？

Answer 1

PCR技术是DNA扩增技术，它能在比较短的时间内产生大量的DNA。在获取目的基因后才使用PCR技术。
获得目的基因的方法：
一、构建基因文库
提取总DNA。
用限制性内切酶将总DNA切成小片段，连到质粒或噬菌体载体上，把这些质粒转化到细菌，随着细菌繁殖而复制，这个过程又称为基因克隆（gene clone）
将总DNA包含的基因组各片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上，便构成了该生物的基因文库（gene library）。
二、反转录人工合成互补DNA
细胞核中转录的mRNA，已经加工去除内含子，只有外显子（编码蛋白质的序列），比构建基因文库优越，因此，先从细胞中提取所需的mRNA。
以mRNA为模板，在逆转录酶的作用下，合成互补的DNA片段(complementary DNA, cDNA)，在逆转录完成时， mRNA被降解。在大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段的作用下，再以第一条DNA为模板，合成另一条互补DNA链。
优点 在细胞分化各阶段细胞往往转录出特异的编码特殊蛋白质的mRNA。因此，用cDNA方法获取的DNA片段往往是具有特定功能的目的基因。

Answer 2

可以利用基因工程技术来分离目的基因，大致步骤是：1.从供体中制备高纯度的染色体基因组DNA；2.用合适的限制酶把DNA切割成若干个片段；3.将这些片段分别与适当的载体分子进行体外连接；4.重组载体导入受体细胞中或包装成噬菌体，适宜条件下培养；5.观察培养基中的重组菌落或噬菌斑，筛选阳性克隆，再将其克隆中的目的基因提取分离出来即可。

Answer 3

如何从基因文库中获取目的基因