转基因得到了转化苗，做PCR的时候，如果质粒P出了阳性 对照的基因组没有条带 是不是就能确定没转进去基因
第一次做的时候，质粒是阳性的，样品有2个在目的片段那也出现了条带，但很暗，后来再做实验，那两个很暗的条带也没有了，而且每次都会出现非特异性条带，是怎么回事？
求高手帮忙解答。
基因组提出来了，PCR之前跑电泳了，基因组没有问题
现在又出现新问题了“做PCR检测转基因植株时，引物为300bp左右，质粒在300bp左右出现了条带，而基因组在300bp左右没有条带，在700bp左右出现条带，是什么原因”
2、没转进去；
3、转进去之后丢失
转基因得到了转化苗,做PCR的时候,如果质粒P出了阳性 对照的基因组没有...
除了质粒，你还应该加一个水作为副对照检验是否是实验操作问题。另外还有一个野生型做正对照，看与质粒和实验组的对比。你可以在PCR前电泳检查一下看是否有条带，有可能你提取基因组出了问题也说不定，还有就是DNA被降解了
pcr开始有条带,后来怎样都没条带
1. 你之前从质粒上能P出来，质粒还有么，要不然用质粒做个正对照？质粒能P出来，基因组P不出来，可能是基因组的质量不太好。2. 你做的时候带上一个你能做出PCR的正对照，表明你一次操作的正确性。3. 换Taq酶试试，看看是不是你的酶问题（因为Taq酶的保真性不高），看看能不能P出来，如果能，...
菌落pcr会出现假阳性结果吗
建议重新以菌落为模板进行PCR检测，再重新以菌液为模板进行PCR检测，因为菌落或者菌液PCR假阳性的几率还是比较高的。但如果还是出现以上结果，推测很可能是平板上残留的连接液中的未连接上载体的目的条带引起的，此时建议再提质粒做PCR检测和酶切检测来彻底证明你的目的片段是否真正与载体连接成功。 个人的...
我做转基因植物,最近一直做PCR鉴定,但只有引物二聚体,原因会有哪些?
最大的可能是转基因植物失败了，可能你转烟草成功了。当然也可能是你PCR了不同的基因，或者引物设计不同？或者上下游引物的同源性太高？我需要知道具体情形，才能更好分析
菌液PCR的时候能P出目的条带,为什么测序却完全不正确?
菌落PCR的假阳性高很可能是因为你做PCR的循环数过大，我们实验室一般对于高拷贝数的质粒，循环数不会超过25个，一般用25个。假阳性出现的原因关键在于做连接的时候加了比较多的目的基因的酶切产物，在转化时，那些没有连接入载体的PCR产物，有的会沾在感受态细胞上，还有的虽然在溶液中，涂板时一起就...
PCR无法P出目的条带
菌落PCR的假阳性高很可能是因为你做PCR的循环数过大，我们实验室一般对于高拷贝数的质粒，循环数不会超过25个，一般用25个。假阳性出现的原因关键在于做连接的时候加了比较多的目的基因的酶切产物，在转化时，那些没有连接入载体的PCR产物，有的会沾在感受态细胞上，还有的虽然在溶液中，涂板时一起就...
pcr需要注意的问题
1、PCR产物的电泳检测时间：一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚至消失。2、假阴性，不出现扩增条带 模板：模板中含有杂蛋白质，模板中含有Taq酶抑制剂，模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。模板核酸变性不彻底。在酶...
...DH5a时,将含有pET-GFP的基因转化给了DH5a,转化后的DH5a确实能够在含...
你确定是Kan抗性吗？如果你的确实是kan的话，平板克隆假阳性的情况很常见。关键PCR设好阳性对照，如果阳性对照有目的条带，而挑的克隆没有，就能说明是假阳性克隆。另外，可以多挑几个克隆，我一般都会挑10-20个。
pcr的关键性技术
出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。 引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行PCR扩增时,扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性。需重新设计引物。 靶序列或扩增产物的交叉污染:这种污染有两种原因:一是整个基因组或大...
关于目的基因的检测与鉴定。第一步,DNA分子杂交技术,为什么可以证明,目的...
再通过同位素的放射性，如果存在杂交，将在显影的胶片上将呈现痕迹，则是插入目的基因了;如果没有杂交，探针都被洗去，胶片不出现特定痕迹---一条黑色条带（杂交带），那么就可以判断目的基因未插入染色体。基因组DNA就是指能够编码蛋白质的整套基因。一般说道基因组DNA指的是核基因组DNA，对于细菌就是...
